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【關鍵詞】 上消化道出血; 老年人;病因
上消化道出血(upper gastrointestinal hemorrage，UGH)是指屈氏韌帶以上的食管、胃、十二指腸和胃空腸吻合術后的空腸上段和胰、膽等病變引起的出血[1]，是消化內科的急癥。由于老年患者特有的身體特點，老年上消化道出血的原因、臨床表現及預后與青年患者有所不同。回顧性分析本院2007年1月至2009年1月共收治上消化道出血老年患者經胃鏡確診者60例，現報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 本組60例患者，男38例，女22例，年齡60~81歲，平均72.6歲。60例患者根據嘔血、便血的臨床表現，大便潛血試驗陽性，全部病例均經胃鏡或上消化道鋇餐透視檢查診斷確診，全部符合上消化道出血診斷標準，并排除下消化道出血。
1.2 臨床癥狀入院時有嘔血、黑糞和(或)便血，大便潛血陽性，排除來自口、鼻、咽部及呼吸道出血，其中黑便34例，嘔血8例，黑便+嘔血13例，便血7例。估計出血量1000 m12例， 4例患者出現失血性休克。22例在24 h內就診，其余多在3 d內就診。
1.3 治療方法本組主要采用內科保守治療，患者入院后均絕對臥床休息，通過補充血容量、輸全血或紅細胞懸液，靜脈應用質子泵抑制劑如奧美拉唑等。對于出血量大者可以使用垂體后葉素收縮內臟血管，降低門脈及側支循環壓力，如果有禁忌證可選用生長抑素類藥物如醋酸身曲肽注射液(善寧)等。同時對合并慢性疾病者給予相應治療。經內科治療48 h后無效而且出血加重的患者可考慮進行手術治療。
2 結果
本組老年人上消化道出血的病因為十二指腸潰瘍18例，胃潰瘍16例，肝硬化食管胃底靜脈曲張破裂出血7例，復合潰瘍6例。腫瘤7例，其他5例，1例未行胃鏡檢查，自動出院，未能明確診斷。老年組復合潰瘍、胃潰瘍、腫瘤高于非老年組(P
3 討論
在老年人上消化道出血的病因中，仍以消化性潰瘍占首位、特別是胃潰瘍多見，十二指腸潰瘍所占比例明顯下降;而中青年組十二指腸潰瘍明顯多于胃潰瘍，與文獻報道一致[2]。老年人胃潰瘍增多的原因可能與老年人胃黏膜呈退行性變，血供不足致營養不良，分泌功能低下，使胃黏膜上皮細胞修復功能受損，胃黏膜屏障功能減退;胃黏膜的營養因子如胃泌素、表皮生長因子等的減少， 胃腔內H+濃度明顯增高會使其反彌散增多，胃黏膜屏障功能受損，致其防御能力減退有關[3，4]。同時，老年人動脈硬化等引起胃黏膜血流量減少，影響黏膜的再生修復亦是其原因之一。老年人常因其他疾病長期服用非甾體類藥物，對胃黏膜有明顯損害，非甾體類藥物致胃腸出血可能與以下因素有關:① 抑制環氧化酶-1的活性，減少前列腺素的合成;②抑制血栓素A2的合成，使血小板聚集減少，誘發出血;③ 異常增多的白三烯及氧自由基對黏膜有毒性作用;④削弱胃黏膜屏障，影響上皮細胞的修復功能;所以老年人尤其是有胃腸疾病者應慎用非甾體類藥物，必要時可同時服用抑酸類藥或胃黏膜保護劑以進行預防，警惕出血情況的出現。
急診胃鏡對上消化道出血的意義重大，不但可確定有無活動性出血，還可對選擇處理方法有指導意義[5]。急性胃黏膜病變診斷在急診胃鏡檢查前非常困難，因病變淺，能在短時間內愈合，應用常規胃鏡檢查難以發現這種病變，急診胃鏡開展使急性胃黏膜病變診斷率顯著提高。此外，急診胃鏡檢查對選擇處理上有指導意義，當發現出血病灶為癌腫引起者，需轉外科治療，但對急性胃黏膜病變多數用內科治療，可鏡下止血，如噴灑止血藥物凝血酶等，常能很快控制出血。老年人上消化道出血，特別是合并有其他疾病或由其他原發病所致者，故治療上應采取綜合治療措施，在病因診斷及治療的同時，應緊急處理上消化道出血。內科治療主要是補充血容量，控制出血和再出血，及時輸血輸液，以維持有效血液循環量。凡受體阻滯劑甲氰咪呱和立止血對老年上消化道出血可作為首選藥物，胃鏡下使用去甲腎上腺素冰鹽水灌洗后局部噴灑凝血酶療效肯定，值得在基層醫院推廣。
參 考 文 獻
[1] 鄭芝田.胃腸病學.人民衛生出版社，2006:301-307.
[2] 黎忠信，鐘華志.1869例上消化道出血病因及相關因素分析.中華消化內鏡雜志，2001，8(1):19.
[3] 葉任高，陸再英，謝毅，等.內科學.人民衛生出版社，2005:480.
【摘要】 目的 對亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)基因進行克隆、表達和免疫學初步研究。方法 將亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1克隆到原核表達質粒pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL-21/DE3中用異丙硫代-β-D半乳糖苷誘導表達，表達產物通過十二烷基磺酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定，用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化，用蛋白印跡法(Western blotting)進行免疫學分析。結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果均表明重組質粒pET-28a(+)-EF-1構建成功。重組蛋白可被感染了亞洲牛帶絳蟲患者血清和豬血清識別，表明其具有免疫反應性。結論 亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1基因可在原核表達系統中獲得具有免疫學活性的表達，為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎。
【關鍵詞】 亞洲牛帶絳蟲；延伸因子-1；基因克隆；原核表達
ABSTRACT: Objective To clone and express the novel gene named elongation factor 1 (EF-1) of Taenia saginata asiatica in order to analyze the immunogenicity of the recombinant protein. Methods By screening the full length cDNA plasmid library， the coding region of EF-1 was amplified with PCR， and cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then expressed in E.coli BL21 with IPTG induction. The recombinant protein was detected by SDS-PAGE and purified by Ni-IDA affinity chromatography， and its immunogenicity was analyzed by Western blotting. Results PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant expression plasmid was successfully constructed. Western blot analysis of EF-1 recombinant protein testified that the recombinant protein could be recognized by immunizing the serum of swine and patient， therefore indicating its immunogenicity. Conclusion A novel gene coding EF-1 of Taenia saginata asiatica was cloned and expressed successfully. The purified protein of EF-1 will be of importance for further research on the biological function of the gene.
KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; elongation factor 1(EF-1); molecular cloning; prokaryotic expression
亞洲牛帶絳蟲(Taenia saginata asiatica)是近30年來發現的一種成蟲形態與牛帶絳蟲相似，而囊尾蚴卻與豬囊尾蚴相似并以豬作為中間宿主的人體帶絳蟲。2006年我們在前期研究的基礎上進一步系統地開展對亞洲牛帶絳蟲在分類地位、分子診斷和疫苗等方面的研究［1-4］，為制定預防人體帶絳蟲病策略提供依據。本研究從亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA質粒文庫中篩選出一個延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)的同源基因，構建了pET-28a(+)-EF-1原核表達載體，并對其原核表達產物進行了初步的免疫學研究，為進一步研究其生物學功能奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 血清來源
感染亞洲牛帶絳蟲豬血清由貴陽醫學院寄生蟲學教研室提供，患者血清采自亞洲牛帶絳蟲流行區貴州省都勻市米秀鄉，健康人血清由中山大學熱帶病重點實驗室提供。
1.1.2 文庫、質粒、菌株
蟲體標本采自亞洲牛帶絳蟲流行區貴州省都勻市米秀鄉，亞洲牛帶絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建、EST測序及Unigene 分析與上海聯合基因有限公司合作完成。原核表達質粒pET-28a(+)和大腸桿菌BL-21/DE3由中山醫學院病原生物學實驗室保存。
1.1.3 主要試劑和工具酶
Ex Taq酶(含dNTP)、EcoRⅠ、XhoⅠ、T4 DNA連接酶及DNA標準(DL2000)均購自大連寶生物工程公司；異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)購自美國Promega公司；Ni-IDA Agarose(cat No：69670)購自美國Novagen公司；蛋白分子量標準購自立陶宛MBI公司；DNA凝膠回收試劑盒、質粒純化試劑盒購自北京賽百盛基因公司；辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬IgG二抗、DAB(3，3二氨基聯苯胺)顯色試劑盒均購自武漢博士德有限公司；PVDF膜購自Millipore公司；TMB顯色試劑盒購自美國BD公司；SDS、丙烯酰胺、亞甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸胺、尿素等試劑均購自上海申友生物科技公司。
1.1.4 引物合成和DNA測序
基因擴增引物和重組質粒DNA測序由Invitrogen上海生物技術有限公司合成。
1.2 方法
1.2.1 EF-1基因的識別
將獲得的亞洲牛帶絳蟲unigene進行Blastx分析，獲得編碼亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因文庫質粒編號為T.a HC23-E9，GenBank登錄號為EF420501的同源基因；并通過瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(ExPASY， ca.expasy.org/)預測其理化特性。
1.2.2 EF-1基因的擴增 根據已獲得的EF-1編碼序列，利用DNAClub和PCRdesign設計引物。上游引物：CTAGAATTCATGGAGTGTGCGTTGAAGTTC，帶EcoRⅠ酶切位點；下游引物：GGGCTCGAGTTACAATTTGTTGAAGGAAG，帶XhoⅠ酶切位點。以亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA文庫中EF-1基因的克隆質粒為模板，94 ℃預變性5 min后，熱循環參數為94 ℃ 1 min，57 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共35個循環，最后72 ℃延伸10 min。PCR產物10 g/L瓊脂糖凝膠電泳回收。
1.2.3 重組原核表達質粒［pET-28a(+)-EF-1］的構建及鑒定
將PCR產物和原核表達質粒pET-28a(+)經EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切后回收，連接、轉化大腸桿菌BL-21/DE3感受態細胞，卡那霉素篩選陽性克隆。對陽性克隆提取質粒進行PCR、雙酶切和測序鑒定。
1.2.4 重組蛋白的表達
將確定能表達重組蛋白的單菌落接種于5 mL LB培養基中，過夜培養后1∶100轉接到1 000 mL培養基中，培養至A600約為0.6時加入IPTG至終濃度為1 mmol/L，28 ℃、250 r/min進行誘導。誘導4 h后離心收菌，用SDS-PAGE檢測蛋白質的表達。
1.2.5 菌體的裂解、重組蛋白可溶性判斷及待純化融合蛋白上清的制備
取單菌落接種于1 000 mL含卡那霉素的LB培養基中，37 ℃震蕩培養至A600為0.6時，加入IPTG使其終濃度為1 mmol/L，28 ℃震蕩培養4 h，4 ℃離心(6 000 g×10 min)，收集菌液，按文獻［5］的方法，每克菌(濕重)加入3 mL裂解緩沖液，重懸細菌沉淀，裂解液冰上超聲破碎(160 W，超聲1 s，停2 s，超聲5 min)，4 ℃ 13 000r/min離心20 min，收集上清和沉淀，分別取上清10 μL加入4×SDS上樣緩沖液和沉淀微量加1×SDS上樣緩沖液，煮沸5-10 min后行150 g/L SDS-PAGE判斷重組蛋白的可溶性。
1.2.6 尿素變性純化重組蛋白
在得到的包涵體(超聲后沉淀)中加入A液10 mL重懸，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，棄上清，重復2次，再用B液洗滌1次，4 ℃ 6 000 r/min離心15 min。將洗滌后的包涵體沉淀加入8 mol/L尿素(溶于基礎液)18 mL放置1 h左右，沉淀完全溶解，溶液清亮透明。采用透析法，逐步降低尿素濃度(8-6-5-4-3-2-1 mol/L PBS溶液)。
1.2.7 Western blotting檢測重組蛋白的免疫反應性
將純化的蛋白進行120 g/L SDS-PAGE電泳，使用電轉移儀于100 V冰浴轉印1.5 h，將蛋白轉移至PVDF膜上，將含預染蛋白Marker條帶剪下，PVDF膜轉入感染亞洲牛帶絳蟲豬和患者血清中(1∶100稀釋)，室溫孵育2 h，PBS洗滌3次，每次5 min。然后加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬和抗人IgG(1∶2 000稀釋)，室溫孵育1 h，PBS洗滌3次，每次5 min，DAB顯色至出現目的條帶，超純水終止反應［6］。
2 結 果
2.1 生物信息學分析
該基因與細粒棘球絳蟲EF-1基因(登錄號為AAF641192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%；全長988 bp，編碼區67-868，編碼269個氨基酸。理論分子質量和等電點分別是28 067.8 u和4.88［7］。
2.2 原核重組質粒的鑒定
將重組質粒進行PCR和雙酶切鑒定，產物進行10 g/L瓊脂糖凝膠電泳。結果顯示在500-1 000 bp之間有一清晰的條帶，與目的基因的大小基本相符，證明重組質粒構建成功(圖1)。
2.3 蛋白表達純化結果
將構建好的重組質粒轉化到E.Coli BL-21/DE3中表達，SDS-PAGE電泳分析結果如圖2中第4、5泳道所示，大約在34 ku左右處出現表達條帶，與目的蛋白分子量基本相符。通過破包涵體，將蛋白進行純化，結果如圖2中第6、7泳道所示，其位置與目的蛋白相符，證明目的蛋白純化成功。
2.4 Western blotting鑒定
感染亞洲牛帶絳蟲的豬血清以及感染亞洲牛帶絳蟲的患者血清對純化蛋白的Western blotting均顯示出清晰的條帶(圖3)。
3 討論
研究表明，EF-1是一種在細胞內普遍存在且大量表達的多聚體核糖體蛋白質，在基因表達、翻譯過程中起重要作用［8］。EF-1可能由α、β、γ、δ四個亞基組成，其中EF-1α屬于G蛋白家族，它和氨酰tRNA、GTP一起組成復合體，通過正確地識別mRNA上的密碼子和tRNA上的反密碼子，負責轉運氨酰tRNA 到80S核糖體，并具有低水平GTP酶的活性。EF-1β具有鳥苷酸交換活性，在EF-1α從核糖體離開并且構象由GDP形式變成GTP準備與新的AA-tRNA相互作用的過程中，需要EF-1β作為催化劑。EF-1γ常與EF-1β形成復合物，具有增加后者鳥苷酸交換的功能。至少在脊椎動物中，EF-1還有第四個亞基EF-1δ，尤其在其羧基端與EF-1β具有同源性，而在氨基端無同源性，表明它們可能具有不同的功能［9-10］。我們從亞洲牛帶絳蟲cDNA文庫中識別出了一個EF-1的全長編碼基因，其編碼的氨基酸序列與GenBank中細粒棘球絳蟲的EF-1基因 (登錄號為AAF64192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%，推測其為亞洲牛帶絳蟲EF-1基因，并且含有完整的開放閱讀框，是一個全長cDNA序列。
通過生物信息學分析，該蛋白的理論分子質量為28 067.8 u，而質粒pET-28a(+)的載體標簽序列的分子質量為6 ku，所以重組蛋白的分子質量大約應為34 ku。圖2的4泳道顯示的重組蛋白條帶與預期的大小是一致的，并且條帶很濃，但從該圖的5泳道看出上清沒有表達，說明該蛋白是以包涵體的形式表達，通過尿素變性純化重組蛋白，得到了條帶很濃的純化蛋白(圖2第7泳道)。本研究為包涵體蛋白的純化積累了經驗，同時還證實了重組蛋白在純化后具有免疫反應性，獲得了具有免疫活性的重組蛋白，為進一步研究其生物學功能以及在診斷尤其是疫苗研究方面的作用奠定了基礎。
參考文獻
［1］Fan PC， Lin CY， Chung WC. Experimental infection of philippine Taenia in domestic Animals ［J］. In J Parasitol， 1992， 22(2):235-238.
［2］包懷恩. 我國亞洲牛帶絳蟲研究的現狀和展望 ［J］. 熱帶醫學雜志， 2002， 2(3):215-219.
［3］黃江，胡旭初，包懷恩，等. 亞洲帶絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建及EST測序 ［J］.熱帶醫學雜志， 2007， 7(2)116-118.
［4］黃江，胡旭初，包懷思，等. 亞洲帶絳蟲成蟲鈣調神經磷酸酶B基因的克隆和生物信息學分析 ［J］. 中國病原生物學雜志， 2008， 3(1):56-59.
［5］薩姆布魯克J，弗里奇EF，曼尼阿蒂斯T. 分子克隆實驗指南 ［M］. 第2版. 北京：科學出版社， 2002:822-849.
［6］Harlow E， Lane D. 抗體技術實驗指南 ［M］. 第1版，北京：北京科學出版社， 2002:161-170.
［7］龐建新，黃江，胡旭初，等. 亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因的克隆和分析 ［J］. 熱帶醫學雜志， 2007， 7(6):513-515.
［8］Andersen Gr， Nissen P， Nyborg J， et al. Elongation factors in protein biosynthesis ［J］. Trends Bio Sci， 2003， 28:434-440.
關鍵詞：硫化橡膠 邵氏硬度 拉伸性能
中圖分類號：TQ330 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）05（b）-0229-02
橡膠制品在現代工業中的應用廣泛，在試驗工作中對于橡膠物理力學性能就會嚴格要求其達到相應指標。為了了解其力學性能，控制和調整生產工藝及評定產品的達標情況和硫化情況，設計邵氏硬度和拉伸性能都是橡膠物理性能試驗中重要的必不可少的項目。并且在試驗中減少影響試驗結果準確性的無法避免的不利因素，這是十分必要的。本文結合三種樣品的試驗，就影響硫化橡膠的邵氏硬度和拉伸性能試驗結果的主要因素及其原因進行了分析。
1 試驗及結果分析
1.1 影響邵氏硬度試驗結果的因素
（1）試樣厚度。邵爾A型硬度值（以下簡稱硬度值）是由壓針壓入試運行的深度來測定的，因此試樣的厚度直接影響試驗結果。圖1是材料為SBR的膠料試樣在不同厚度下測得的不同數值的邵氏硬度。
由圖1可見，試樣厚度越薄其硬度值得紀念就越大，隨著試運行厚度的逐漸增大，其硬度值也隨之逐漸變小。原因是，當壓針壓入試樣，試樣受到壓力后變形，受壓的部分變薄，對于過薄的試樣，此時部分壓力直接施加于試臺上，因而壓入試樣的深度減小，硬度值增大。所以在GB/T 531-1999中規定了進行邵氏硬度試驗的樣品厚度為6 mm。
（2）讀數時間。在測量邵氏硬度時，讀數時間對試驗結果的影響很大。有些比較陳舊的硬度計采用的是指針式讀數，而壓針受壓后立即讀數與指針穩定后讀數，兩者之間的差異很大，特別是在某些合成橡膠中就更為明顯了。表1是EPDM膠料壓針壓下后的不同時刻讀數的數值。
由表1可以看出，立即讀數與指針穩定后讀數，兩者之間的硬度值相差達5HA。所以對于一些沒有數顯裝置的硬度計來說，如何正確讀數，縮短讀數時間的差異對試驗結果就顯得非常重要了。
（3）停放時間和環境溫度。在GB/T 531-1999標準中，要求橡膠進行硬度試驗前試運行的調節時間不得少于3 h；而硫化與試驗之間的時間間隔為16 h至3個月。若停放時間過長，往往造成硬度值增加，其增加的數值隨時間長短不同而不等，某些橡膠的HA值變化量達2-4。其原因是隨著停業的增加，橡膠試樣在環境溫度、濕度、光照和空氣流動等方面因素的影響下，不斷進行著相當于老化試驗的過程，而使得硬度值上升。
溫度對試驗結果也有影響。橡膠為高分子材料，其硬度值隨環境溫度變化而變化，溫度高則影響程度也不同，對于一些結晶比較慢的天然橡膠，溫度對其影響小些；而對于氯丁橡膠、丁苯橡膠影響則相對比較顯著。
（4）其它因素。另外還有一些因素也將影響到試驗結果的準確性，比如壓針楞角磨損、壓針壓入時沒有與被測試試驗面垂直等。無論是其中的一項或多項，都將造成較大的試驗誤差。所以，當了解了影響硬度試驗結果的因素后，就應該盡可能地避免這些因素的影響，提高試驗結果的準確性。
1.2 影響拉伸性能試驗結果的因素
（1）試樣寬度。在橡膠的拉伸試驗中，一般采用啞鈴狀試樣。在GB/T 528-1999中規定了幾種不同的裁刀尺寸規格，工作部分寬度不同，試驗結果也不同，而對于不同寬度下測得的試驗結果，一般沒有可比性。但一般而言，工作寬度增加，拉伸強度和扯斷伸長率都有所降低。見表2。
產生這種現象的原因可能是：①膠料中存在微觀缺陷，這些缺陷經過混煉并沒有被消除，只是分布均勻了些，仍存在于膠料之中，所以面積越大存在這些缺陷的機率也越大。②試驗過程中工作部分寬度存在受力不均勻。寬度方向上邊緣部分的毅力大于中間部分的應力，寬度越寬，差異也就越大。這也是造成早期斷裂的一種原因。
（2）試樣厚度。在進行拉伸試驗時，標準中規定的試運行厚度為2.0±0.3 mm，但隨著試樣厚度的增加，拉伸強度和扯斷伸長率都有所下降。分析其原因有：①厚度增加，使工作部分橫截面積增加，受力時使試樣邊緣和中心的受力不均情況也增加，從而使拉伸強度和扯斷伸長率下降。②由于橡膠試片在壓制過程中，模具本身存在缺陷，從而使試片的厚度有超差，在這種情況下制取試樣，截取的試樣斷面現狀會產生變形。由于試樣厚度增加，試片在受到裁刀壓力后產生變形，使截得的試運行中凹進去而使截面積減小。試樣越厚，斷面的變形就越大，截面積就越小，所測得的拉伸強度和扯斷伸長率當然也就小了。因此，在壓制試片時，應盡量提高試樣厚度的尺寸精度，從而減小試樣厚度對試驗結果的影響。
（3）拉伸速度。硫化橡膠在進行拉伸試驗時，標準規定的拉伸強度為500±50 mm/min，但標準中也允許采用200±20 mm/min作為拉伸速度的。由試驗得出，當速度在200～500 mm/min之間時，速度對試驗結果的影響并不顯著，但當拉伸速度過慢或過快，則會對試驗結果產生較大的影響。圖2是以四種不同速度對EPDM膠料進行了的試驗情況。一般而言，速度增加，松弛產生影響的時間就短，由松弛引起的應力減少就小，所以拉伸強度就提高，反之則下降。
（4）壓延方向。對硫化橡膠取樣，應注意壓延方向。在GB/T 528-1999標準中規定，片狀試樣在拉伸時，其受力方向應與壓延方向一致，否則其試驗結果顯著降低（見表3）。
由表3中的試驗數據可以看出，平行于壓延方向的拉伸強度比垂直于壓延方向的拉伸強度高。產生這一現象的原因可能是膠料在混煉時受到一定的剪切應力，順輥筒方向分子鏈排列整齊，相當于對分子進行一次取向，所以平行于壓延方向的拉伸強度要比垂直壓延方向時得到的結果要大。
（5）停放時間。GB/T 3941-1991標準中規定，硫化后的橡膠試樣必須在室溫中停放一段時間后才能進行試驗，停放時間不得少于16 h最多不得超過15 d（天），否則對試驗結果會有影響。隨著停放時間的延長，拉伸強度和扯斷伸長率會稍稍提高，但影響不十分明顯。其原因是停放一定時間后，可使試運行在加工過程中產生的內應力趨向均勻分布，減小以至消失，因而在拉伸過程中，試樣受力均勻，不致因為受到應力集中影響而提早斷裂。
2 結語
從硬度和拉伸性能兩方面品影響硫化橡膠力學性能試驗結果的幾個因素，并簡要分析了原因。當然還有其它因素也會對最終試驗結果造成影響，本文的目的是通過了解這些內容，避免一些試驗誤差的產生，從而提高試驗結果的準確性。
參考文獻
關鍵詞：英語學習兩極分化原因對策
義務教育英語課程標準指出：“英語課程要面向全體學生，關注語言學習者的不同特點和個體差異。”這是英語課程標準的基本理念，也是素質教育的出發點。但由于各種原因，學生進入初中后，越來越多的學生開始對英語學習不感興趣，學習態度不端正，成績越來越差；而另有少數學生則學習興趣濃厚，學習輕松且成績優良，兩極分化不斷加大。如何處理解決好這一問題，是學生以后能否繼續學好英語的關鍵。
一、兩極分化的形成原因
兩極分化的現象在七年級的上學期就已經出現了，造成學生學習英語積極性不高，出現兩極分化的主要原因大致有以下四種：
1.教材的變化
初一新教材與老教材相比跨度大，語言覆蓋面廣，詞匯量大，練習里常出現許多生詞，一些學生在小學基礎不好，要想跟上就更難了。
2.學生的學習方法
（1）學習不得法。例如：學生音標不認得，念單詞用漢字注音，有些學生仍然是和漢語連在一起，記生詞靠死記硬背，學語法死搬硬套，練習句型生吞活剝，寫句子逐詞對譯，始終擺不脫漢語習慣。
（2）缺乏足夠的毅力、恒心。很多學生學習英語有很大的盲目性和隨意性。他們學英語只是新鮮一陣，覺得這門課好像很有意思，一遇困難挫折就喪失信心和興趣，逐漸就不學了。
3.教師的教學方法
教師授課時不重視教學內容和形式的設計，采取“滿堂灌”的方法，側重教授學生知識，忽視指導學生掌握學習策略。長期如此，學生對學習失去興趣，在課堂上由于信心不足而不敢開口說英語，往往又被教師忽視，導致惡性循環。
二、避免兩極分化的幾點對策
（一）、學生方面
1.培養學習興趣
（1）興趣是最好的老師。缺乏興趣，學生只能被迫去學，根本談不上創造學習。要把學生從“要我學”轉變為“我要學”就需要教師持續不斷地激發和培養學生學習英語的興趣。教師要注意教學的生動性和趣味性，使課堂教學生動活潑，讓學生扮演各角色，相互對話，講故事，表演短劇節目。教師還要善于利用實物、卡片、圖表、圖片、身勢語言，創設生動形象化的情景；播放英語歌、做游戲、猜謎、搞競賽等活動。通過這些活動激發學生學習熱情。時間一久，這些興趣就會轉化為強大內部學習動機。使學生進行自覺、自主、有創造思維的學習。
（2）多為學生創造學習成就感。教師通過各種方式，激勵學生的成就感和進取精神，因材施教，因人而異。著重引導學生積極思考，敢回答，對后進生不能回答時應耐心鼓勵說“Try again”、“Don’t worry， Take it easy.”、“I think you can do it will next time.”，使不同學生都能體驗成功喜悅和自身價值，對學生消極情緒，思想顧慮和精神負擔要給予耐心指導幫助。
2.養成良好的學習習慣和科學的學習方法
（1）要養成預復習的習慣。在預復習的過程中，學生要敢于發現問題，并自己努力想辦法解決問題。預習新知使學生獲得所學知識的心理準備，而復習舊知則能加深學生對重難點的認識，對學生長期的英語學有裨益。
（2）循序漸進，一點一滴積累。在學習過程中不急躁不貪心，掌握一點是一點。
（3）多讀，多聽，多講，多寫，找內容有知識性，趣味性，娛樂性的英語資料。
（二）、教師方面
1.改進教學方法和手段
（1）改進備課方法。教師的備課應該在認真鉆研教材的基礎上從學生的實際學情出發，確定符合他們認知特點的教學目標，既包括基礎知識和基本技能方面的目標，也包括培養學生綜合能力的目標；準確地理解教學的重點和難點；選準課堂教學的切入點。
（2）改進課堂結構。根據教學的實際需要和學生的實際情況合理地、靈活地安排課堂教學的環節，即對各個教學環節及其課堂所用時間進行合理的調整，使課堂結構更合理、更科學。
（3）創造英語語言環境。盡量用英語組織課堂教學，課外開展“英語角”等興趣小組，加強聽、說、讀、寫四種技能的全面訓練，讓每一個學生都有充分“表現”自己的機會，從而增強學好英語的信心和勇氣。
2.提高教師本身的綜合素養
（1）跨文化交際知識與文化修養。教英語離不開英語文化。英語教學的一個重要目標就是培養學習者運用英語進行交際的能力，而培養這種能力，單靠語音、詞匯、語法、句子是遠遠不夠的，還要學習了解語言形式之外的更豐富的文化內容。英語教師不僅應該具備跨文化意識，并且在教學中時時向學生滲透這種意識。
（2）人格魅力與師德修養。第一、健康的身心，積極的人生態度。由于多方面因素，農村中學教師都有各種心理問題，這一方面需要全社會對教師和教育事業更多的支持和關注，另一方面也需要教師學習和鍛煉，不斷提高自身的心理素質和精神境界。第二、永恒的愛心。關愛每個學生是對教師的起碼要求。教師對學生應有“賞識教育”和“愛心教育”。第三、開放的心態與創新的意識。知識和信息時代要求教師不斷更新自己的知識結構。
總之，在英語教學中避免兩極分化的這項工作是一項艱巨而長期的系統工程。教師應該采取一些行之有效的措施，激發學困生的學習興趣，增強其學習信心，使其成績穩步上升，并最終達到消除兩極分化的目的。
參考文獻
【關鍵詞】 非小細胞肺癌
【Abstract】 AIM: To investigate the correlation between the expression of transforming growth factor beta (TGFβ) and the angiogenesis in nonsmall cell lung cancer (NSCLC). METHODS: MVC and expression of TGFβ1 in 50 carcinomatous specimens and expression of TGFβ1 in 35 paracarcinomatous specimens from the same 50 cases with NSCLC were detected by SP immunohistochemistry. RESULTS: Active angiogenesis in NSCLC was detected and it was related with NSCLC progression and lymph node metastasis， but not related with histological types. Significant difference of the expression of TGFβ1 was found between stage Ⅰ and Ⅱ (P
【Keywords】 NSCLC; TGFβ; angiogenesis; immunohistochemistry
【摘要】 目的：研究血管生成與轉化生長因子β（TGFβ）在非小細胞肺癌（NSCLC）的表達及其相互關系. 方法：通過應用SP免疫組化方法檢測50例NSCLC組織內微血管計數（MVC）及50例NSCLC組織和35例癌旁組織中TGFβ1的表達. 結果：NSCLC癌組織中存在活躍的血管生成，血管生成與病變分期進展和淋巴結轉移有關，與組織分型無關. TGFβ1陽性表達在NSCLC的I期與II期及I期與III期之間有顯著意義（P
【關鍵詞】 非小細胞肺癌；轉化生長因子β；血管生成；免疫組織化學
0引言
腫瘤的血管生成（angiogenesis）與腫瘤的發生、發展和轉移的全過程密切相關. 肺癌細胞通過合成、分泌血管生成因子調節腫瘤組織的血管生成從而影響肺癌的發生、發展和轉移，其中的轉化生長因子β(transforming growth factorβ， TGFβ)在原發性肺癌的表達、生物學作用及其與血管生成的關系為人們所關注. 為進一步了解其在非小細胞肺癌（nonsmall cell lung cancer， NSCLC）的進展和轉移中的表達及與血管生成的關系，我們采用免疫組化的方法對TGFβ1在非小細胞肺癌及癌旁組織中的表達及其與腫瘤血管生成的關系進行了觀察.
1材料和方法
1.1材料
199801/200012經手術切除的NSCLC標本50(男35，女15)例， 年齡33～85（平均58士9）歲. 其中35例含癌旁組織. 鱗癌29例，腺癌21例（包括肺泡細胞癌3例）. TNM I期18例，II期20例，III期12例. 有肺門、縱隔淋巴結轉移32例，無淋巴結轉移18例. 兔抗人多克隆TGFβ1抗體，濃度1∶60（武漢博士德生物技術公司）；鼠抗人VIII因子相關抗原抗體，濃度1∶100（北京中山生物技術有限公司）；鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒（福州邁新生物技術開發公司）等.
1.2方法
石蠟標本切成5 μm厚度切片，脫水、透明、中性樹膠封片. 嚴格按照產品說明書進行SP免疫組化染色. 取已知含有待檢抗原的切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替第一抗體同上方法染色作為陰性對照. TGFβ1表達以每張切片不少于3個視野中的細胞內棕黃色顆粒狀染色，且著色明顯高于背景或背景不著色而細胞著色者為陽性表達. 按染色強度（未著色、弱、中、強）及染色陽性細胞的百分數（0%，1%～25%，26%~50%，>50%），分別積分為0，1，2，3，兩項分數之和為0～2分者計為染色（-），3～6分者計為染色（＋）. 以癌旁間質細胞中出現同上染色顆粒為癌旁組織陽性表達. 微血管計數（microvessel count， MVC）按照Fontanini（J Pathol， 1995;177:57）的方法，用抗FVIIIRA mAB標記血管內皮細胞，可見呈棕色或棕黃色染色的血管內皮細胞，先在低倍鏡（4×15）下觀察確定微血管數量最多的部位，再在高倍鏡（10×15）下，以與周圍細胞和結締組織成分明顯區別的任何一個棕色染色的內皮細胞、或細胞叢為一個血管，只要結構不相連，其分支結構也計作一個血管計數. 腫瘤內硬化區及與腫瘤交界處軟組織內的微血管，有厚的平滑肌及管腔直徑大于8個紅細胞的血管除外. 在高倍鏡下分別計數3個視野內取其平均值即為該例的平均MVC.
統計學處理: 數據以x±s表示，采用SPSS 11.0軟件進行統計分析，多組間均數比較采用方差分析，兩兩組間比較采用最小顯著差法；兩組間均數比較采用t檢驗，方差不齊時采用非參數檢驗；計數資料采用χ2
檢驗；等級資料采用等級資料秩和檢驗.
2結果
2.1NSCLC組織中的微血管生成NSCLC患者50例的平均MVC為（16.0±4.7）/HP，鱗癌、腺癌的平均MVC值分別為(15.5±4.2)，(17.1±5.7)/HP，二者無統計學差異（P＞0.05）；癌組織與癌旁組織比較有顯著統計學意義（P
2.2TGFβ1在NSCLC組織中的分布在50例NSCLC中30例可檢測到TGFβ1表達（Fig 2），陽性表達產物主要分布于癌細胞的胞質內（Fig 2A，B）；癌旁組織中檢測到的TGFβ1蛋白表達主要分布于間質細胞胞質內和極少數吞噬細胞胞質內（Fig 2C，D）. 癌組織TGFβ1陽性率高于癌旁組織（P
3討論
腫瘤的發生、發展和轉移伴隨著新生血管的形成［1］. 腫瘤組織內MVC反映了新生血管生成的強度. 本結果表明NSCLC中存在活躍的血管生成，與癌旁組織比較有統計學差異（P
NSCLC細胞由于其異常的生物代謝，可通過合成、分泌血管生成因子和血管生成抑制因子調節腫瘤組織的血管生成［4］. 體外實驗表明TGFβ通過對VEGF的旁分泌調節作用促進內皮細胞的長入和毛細血管腔的形成，因此促進血管內皮細胞的生長而發揮了促腫瘤血管生成作用［5］.
參考文獻
［1］ Cox G， Jones JL， Walker RA， et al. Angiogenesis and nonsmall cell lung cancer ［J］. Lung Cancer， 2000; 27(2): 81-100.
［2］ Kang Y， Prentice MA， Mariano JM， et al. Transforming growth factorbeta 1 and its receptors in human lung cancer and mouse lung carcinogenesis ［J］. Exp Lung Res， 2000; 26(8): 685-707.
［3］ Wieser R. The transforming growth factorbeta signaling pathway in tumorigenesis ［J］. Curr Opin Oncol， 2001; 13(1): 70-77.
摘 要： 人的全面發展與大學的個性發展是相互統一、內在一致的。本文主要通過分析大學生個性發展和全面發展的相互關系，基于目標牽引式學業規劃闡述個性發展和全面發展對大學生教育培養的重要意義，為大學生人才培養方案提供一定的發展方向和參考思路，促進當代大學生的全面發展。
關鍵詞： 目標牽引 學業規劃 培養策略
一、大學生全面發展的“人學”意蘊
“人的發展”這一命題，在人類歷史的長河中，歷代思想家都有過關注和論述。馬列主義經典作家尤其是馬克思、恩格斯，基于對人類社會發展規律的科學探究，建立了“人學”，其核心即“人的全面發展”思想。“人學”認為：人的全面發展，是人勞動、需要、社會關系、個體人能的綜合式的全面發展，其中，居于關鍵首位或者充當先決基礎條件的是“勞動”。勞動使人類產生了一定的社會需要，在滿足社會需要的過程中，人類不斷形成新的交往形式，產生新的社會關系，進而推動社會的整體前進，在這個過程中，人的全面發展的內涵得到不斷充實和豐富。同時，豐富的社會關系使得人們在各方面形成豐富的社會聯系，個人的社會性日益增強。“人學”認為：“人的全面發展”的邏輯起點是人在個體能力維度的全面發展，是“人的本質力量的公開展示”[1]175。人的全面發展的內涵非常廣泛，在性別、年齡、職業等維度存在一定的差異；個體在體能、智力、情商等方面的綜合式全面發展，是個體能力全面發展的本質內涵，同時也是個體其他能力全面發展的充分和必要條件。“人學”在探討“人的全面發展”思想命題時，主要是基于哲學、政治經濟學、歷史唯物觀等視角展開的。就高等教育范疇而言，“人的全面發展”思想作為高等教育的最高價值目標和具體成果體現，最終必須落實在立德樹人的根本任務上。因此，在考查大學生全面發展的內涵時，我們可以將“人學”作為目標分析的基礎，同時根據大學生的時代特征和具體特點加以豐富和發展，形成系統的培養方案。
二、“人學”視域中的大學生個性與全面發展
大學時代是每個個體個性形成和發展的黃金時期，伴隨著生理和心理的生長發育快速成熟，一個人的社會關系、適應能力、個人素質都在發生巨大的轉變。從馬克思“人學”思想來看，個體素養、個性特征、社會適應能力三者之間的協同發展才是大學生全面發展的應有題中之義。就大學生的個體發展歷程來看，進入大學讀書的階段，首先是學習專業知識和技能，并把它作為提高能力、鞏固社會關系、提高素質、形成個性的基礎，所以，知識理論的全面發展在大學生全面發展的體系中有著不可或缺的重要性。換而言之，大學生要實現個體的全面發展，就必須通過接受高等教育，在理論知識、實踐技能、社會適應、個人素養、個性特征方面奠定協同發展的良好基礎。每個大學生都是獨立發展的個體，有著特殊性。大W生的個性發展，就是在接受高等教育的過程中發揮學習的主觀能動性，結合自身特點，對學習方法和內容做出準確的選擇和科學的判斷，同時要注重培養大學生學會思考、注重創新的意識和勇于進取、大膽實踐的能力。“人學”思想認為：只有“充分發展個性，提高人的社會化程度，才能逐步實現自己的自覺性、自主性和創造性，在社會中展示自己，積極發揮自身的潛能，實現自己的個性的全面發展”[2]359。個性發展不僅對個人而且對整個社會都有至關重要的作用，但個性發展必定受到客觀物質生活的影響。因此，高等學校應該立足立德樹人的根本任務，發揮在社會主義建設者和接班人培養中的功能定位，科學界定大學生個性培養的目標，合理激發大學生個人素養提升的因子，促進大學生全面發展。
三、基于目標牽引式學業規劃的大學生全面發展及培養策略
大學時代正是大學生個性發展最關鍵的時期，每一個大學生都有著獨特的個性與追求。因此，在堅持學生的主體性與教育教學、人才培養的主導性相統一的同時，高等學校應當注重挖掘學生個性發展的潛能，提升學生個性發展的水平，最終幫助大學生實現全面發展。基于此，我們提出了大學生個性與全面發展相結合的策略構想――目標牽引式學業規劃。
所謂“目標牽引式學業規劃”，是指高等學校以“人學”思想為指導，綜合考量、評估學生不同個體的興趣愛好、人格特質等自然屬性，分層次、分眾化開展專業認知教育、職業生涯規劃指導，提供可實現目標的素質拓展活動群和專業教育課程群，并幫助學生明確大學期間的階段性目標、規劃人生發展方向，在學生個體發展的同時實現全面發展的協同。“目標牽引式學業規劃”方案的制訂，在頂層設計上必須堅持以“人學”思想為中心，以人才培養目標為遵循，以大學生個體素養拓展、職業生涯規劃為主線，尊重高等教育普遍規律和大學生身心發展現狀，盤活學校育人資源，協同育人工作機制，突出學生在人才培養過程中的主體間性[3]41。要把“目標牽引式學業規劃方案”貫穿學生學習的整個過程，以學生的發展作為目標，將素質拓展與專業學習有機結合起來，培養過程以學期（或學年）為時間單位分階段實施，深化教育教學改革，為社會培養高素質人才，可以從以下幾個方面著手：
（一）助力大學新生開展自我認知，進行生涯定位。
大學新生在入校之后，入學教育往往配合軍訓展開，學生此時通常對大學生活充滿新鮮感及對未來的生活工作產生迷茫。這時，各高校應借助專業測評工具或和職業生涯規劃理論，為高校新生進行形式具體的新生職業能力傾向測試的性格測驗等，使得新生能夠順利進行自我認知，從而制訂正確的學業或職業的規劃，度過充實的大學生活。在進行過一定的自我認知之后，高校新生對大學和自我的環境已經有了一定的定位，此時，各班級輔導員或者具體負責老師應當根據每一位學生的特點，幫助他們明確個人發展方向和目標，組織學生通過軟件測評，對學生進行職業生涯規劃教育，并結合各專業的特殊情況，開展職業生涯規劃與就業創業課，對大一新生進行系統的指導，幫助他們正確進行生涯定位。
（二）努力提升老生綜合素質，制訂生涯規劃。
步入大二，學生對大學生活已經有了自我了解，對自身也已經有了一定的定位，此時，高等學校應根據學生對學業（職業）規劃的不同需求，幫助其制訂合理的實施計劃。實施計劃包括課堂學習、課外實踐兩個主要組成部分，便于學生在不同時間節點自主選擇具體的課堂學習或課外實踐工作任務（或工作項目），相應專業課老師、輔導員在此過程中進行一對一的跟蹤指導。另外，在開展這一工作前，由學校提供統一模板參考實施。
（三）組織學生進行自我評估，修正階段性目標。
每學年，學校組織學生對照個人階段目標完成情況進行自我評估，并將此項工作納入學生學年考核工作，檢查任務完成情況，及時總結經驗。針對一些未能完成計劃的情況，組織學生全面分析，查找并指出不足，及時提出目標修正措施或整改意見，使得學生的規劃更能適應學校的成才環境，更符合實際情況，更有利于個人成才。
（四）系統謀劃統籌推進，保障目標牽引取得實效。
目標牽引式學業規劃方案是一項系統工程，這就要求高校各部門之間分工協作，積極配合，整體推進，明確各部門的職能，合理規劃，積極調動學生參與的積極性和主動性。伴隨著“目標牽引式學業規劃方案”的實施，學校應成立工作領導小組，具體幫助學生，如學生處，這是與學生最密切的一個部分，輔導員和班主任是與學生接觸最多的，應當對他們進行一定的職業生涯規劃理論培訓，使他們在與學生的日常相處與交流中潛移默化，幫助學生樹立正確的世界觀、人生觀，并通過一系列的班級活動帶領學生進行正確的職業生涯規劃和就業指導。學校各二級院系團委也應通過一系列活動，完善并豐富大學生的課外素質拓展體系，豐富學生的第二課堂，寓教于樂，滿足廣大學生的成才需求。除此之外，教務處、各二級院系、圖書館也應建立健全相應措施，幫助學生全面發展。
參考文獻：
[1]馬克思恩格斯選集（第1卷）[M].北京：人民出版社，1972.
【關鍵詞】 銀屑病 Toll樣受體2 抗鏈球菌溶血素 白細胞介素8
［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression of tolllike receptor 2 (TLR2) mRNA in monocytes of psoriatic patients’ blood and the serum levels of interleukin8 (IL8) and antistreptolysin O (ASO)， and to explore their relevance to pathogenesis of psoriasis.MethodsExpression of TLR2 mRNA were detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) method; serum levels of ASO and IL8 were detected by latex agglutination assay and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) respectively. ResultsExpression of TLR2 mRNA of the patients was higher than that of the controls (t=5.541，P＜0.01). There was no significant difference in the expression of TLR2 mRNA between guttate and plaque psoriatic patients (t=0.318，P＞0.05). The positive rate of ASO in the patients was higher than that of the controls (χ2=8.604，P＜0.01); and the ASO positive rate in guttate patients was higher than that in plaque psoriatic patients (χ2=9.780，P＜0.01). Level of IL8 in psoriatic patients was higher than that controls (t=28.463，P＜0.01); there was no significant difference between guttate and plaque psoriatic patients (t=0.660，P＞0.05). The expression of TLR2 mRNA in psoriatic patients with positive ASO was higher than that in patients with negetive ASO (t=2.407，P＜0.05); the expressions of TLR2 mRNA and IL8 in psoriatic patients had a positive correlation (r=0.637， P＜0.01). ConclusionTLR2 may be involved in the occurence and development of psoriasis by recognizing the invading streptosis and the following generation of cytokines.
［KEY WORDS］psoriasis; tolllike receptor 2; antistreptolysin; interleukin8
銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，與遺傳和環境因素有關，其病因和發病機制尚未完全明確，目前多認為是一種T細胞介導的免疫失衡性疾病。有研究表明，細菌、真菌、病毒等微生物感染與銀屑病的發生和發展有密切關系，并認為銀屑病是一種皮膚抵抗病原微生物的防御性表現［1］。近年來，Toll樣受體(TLR)在感染性疾病及銀屑病中的作用引起國內外有關專家的廣泛關注［2，3］；已有研究表明，IL8可促進銀屑病的炎癥浸潤，介導皮損的發生和發展［4］。銀屑病病人TLR2基因表達國外多集中于對角質形成細胞（KC）的研究，尚未見銀屑病病人外周血單個核細胞TLR2基因表達，以及關于感染與TLR2基因表達及IL8水平關系的相關報道。本文采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR）方法檢測銀屑病病人外周血單個核細胞TLR2基因表達水平，并分別采用膠乳凝集法和酶聯免疫吸附（ELISA）法檢測血清抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）和白細胞介素8（IL8）水平，探討其與銀屑病發病的關系，從而為闡明感染誘發或加重銀屑病提供分子水平的證據。
1 資料和方法
1.1 一般資料
銀屑病病人（銀屑病組）均為我院門診皮膚科病人，具有典型皮損，臨床診斷明確。其中，點滴型銀屑病病人30例，男16例，女14例；年齡17～60歲，平均33.13歲；病程1周～1.5月；發病前1周～1月有發熱、咽喉腫痛或其他上呼吸道感染癥狀。斑塊型銀屑病病人20例，男9例，女11例；年齡18～63歲，平均34.5歲；病程3月～10年；所有病人觀察前1月未接受系統治療，且不伴有其他急慢性疾病。對照組30例，為來我院體檢的健康人，男女各15例；年齡19～64歲，平均36.24歲；近1月內均無發熱、咽喉腫痛等明顯上呼吸道感染癥狀，且不伴有其他急慢性疾病。
1.2 標本收集
常規消毒皮膚后，抽取外周靜脈血5 mL，其中2 mL枸櫞酸鈉抗凝，用于TLR2 mRNA的檢測；其余3 mL置試管中，待血塊收縮后以2 500 r/min離心分離血清，分裝后置-20 ℃冰箱保存，分別用于ASO、IL8水平檢測。
1.3 TLR2 mRNA表達檢測
以小量血液總RNA抽提試劑盒（上海華舜生物工程有限公司）提取外周血中總RNA，紫外分光光度計（DU640，美國Beckman公司）測定其純度和含量，取RNA樣本2 μg采用一步法RTPCR檢測TLR2 mRNA表達，以β肌動蛋白（βactin）為內參照。引物（上海生工生物工程技術服務公司合成）序列為：TLR2正義：3′GCCAAAGTCTTGATTGATTGG5′，反義：3′TTGAAGTTCTCCAGCTCCTG5′，產物長度為347 bp；βactin正義：3′ACGTCTGCTGGAAGGTGGAC5′，反義：3′GGTACCACCATGTACCCAGG5′，產物長度為168 bp。
1.4 擴增產物檢測
PCR擴增完畢后，每個反應體系取產物2 μL，于20 g/L瓊脂糖凝膠中進行電泳，在紫外線透射凝膠成像儀（VilberLourmat，France）中分析電泳帶的灰度值，以TLR2/βactin記錄結果，作為TLR2 mRNA的相對表達水平。
1.5 ASO檢測
采用膠乳凝集法（試劑為北京利德曼生化有限公司生產的ASO膠乳試劑），以ASO＞2×105 kU/L為陽性。
1.6 血清IL8水平測定
采用雙抗體夾心ELISA法（試劑盒為Biosource ELISA kit，北京中昊時代生物技術分裝）。具體操作嚴格按試劑盒說明書進行，即刻測量標本在492 nm波長處吸光度值，并根據標準曲線查出其濃度。
2 結
果
銀屑病組TLR2 mRNA的表達水平顯著高于正常對照組，差異有統計學意義（t＝5.541，P＜0.01）；點滴型組與斑塊型組比較差異無顯著性（t＝0.318，P＞0.05）。銀屑病組ASO陽性率明顯高于正常對照組，差異有顯著性（χ2=8.604，P＜0.01）；點滴型組明顯高于斑塊型組，差異亦有顯著性（χ2=9.780，P＜0.01）。銀屑病組IL8水平顯著高于正常對照組，差異有顯著性（t＝28.463，P＜0.01）；點滴型組與斑塊型組相比差異無顯著意義（t＝0.660，P＞0.05）。點滴型銀屑病病人ASO陽性者TLR2 mRNA表達水平（1.020±0.152）明顯高于ASO陰性者（0.871±0.186），差異有顯著意義（t＝2.407，P＜0.05）；銀屑病病人外周血單個核細胞TLR2 mRNA表達與血清IL8水平呈正相關（r=0.637，P＜0.01）。見表1。表1 各組TLR2 mRNA表達及ASO、IL8檢測結果比較
3 討
論
3.1 TLR2與銀屑病的關系
TLR是一新的蛋白家族，是機體通過感知病原微生物直接做出防御反應的天然免疫受體，可啟動天然免疫反應和影響后繼的獲得性免疫反應［2］，成為天然免疫和獲得性免疫之間的橋梁。TLR中與銀屑病關系密切的主要是TLR2。以往對TLR2與銀屑病關系的研究，主要來自對皮膚KC的觀察。
BAKER等［3］采用免疫染色法研究顯示，TLR2在正常皮膚表皮基底細胞高度表達，而在銀屑病病人皮損處表皮基底細胞中度表達，在表皮上部KC高度表達。已有研究表明，銀屑病皮損中細菌、真菌等的定植明顯高于正常皮膚，因此，TLR2在表皮上層表達上調可能是角蛋白對病原微生物存在的反應。
已有研究表明，銀屑病病人皮損中存在TLR2基因表達上調，但尚未見血液中單個核細胞TLR2基因表達與銀屑病關系的相關報道。本實驗采用高敏感性的RTPCR方法對銀屑病病人外周血單個核細胞TLR2 mRNA表達進行研究，結果顯示，銀屑病組TLR2 mRNA表達顯著高于正常對照組，差異有顯著性，提示銀屑病的發生、發展過程中也存在外周血單個核細胞TLR2基因表達上調。
3.2 鏈球菌感染與銀屑病的關系
鏈球菌感染人體后，體內可產生抗ASO抗體。本研究結果顯示，銀屑病組ASO陽性率明顯高于正常對照組，差異有顯著性，提示尋常型銀屑病的發生或發展與鏈球菌感染有關；點滴型病人ASO陽性率亦高于斑塊型病人，兩組之間有顯著性差異；點滴型病人ASO陽性者TLR2 mRNA表達水平高于ASO陰性者，提示鏈球菌感染可能通過誘導TLR2基因表達上調，活化TLR信號轉導通路，從而介導銀屑病皮損的發生。
點滴型銀屑病病人發病前均有不同程度的上呼吸道感染癥狀，提示可能存在鏈球菌感染；而斑塊型銀屑病病人無明顯上呼吸道感染史，而統計學分析顯示兩組間TLR2 mRNA表達無顯著性差異［5］。據此我們推測鏈球菌感染可能在點滴型銀屑病的發病過程中起重要作用，而斑塊型銀屑病可能與其他真菌、細菌、病毒感染的關系更為密切，如馬拉色菌及金黃色葡萄球菌、HIV等［6，7］，但確切原因還有待于進一步研究。
3.3 IL8與銀屑病的關系
IL8是一種重要的多元性炎癥細胞趨化因子，主要來源于活化的單核細胞、巨噬細胞、部分CD+4T淋巴細胞、血管內皮細胞、KC等多種細胞。有研究顯示，銀屑病病人皮損處KC表達IL8及其受體明顯高于正常對照組，并認為這可能與銀屑病病人皮損局部表現出的KC高度增殖有關［4］；也有文獻認為，血清中IL8水平明顯升高［8］。本文結果顯示，銀屑病病人血清IL8水平明顯高于正常對照組，差異有顯著性，這與以往研究結果一致；銀屑病病人外周血單個核細胞TLR2基因表達與血清IL8水平呈正相關，提示TLR2可能介導了病原微生物誘導的細胞因子IL8分泌，繼而IL8通過趨化炎癥細胞至皮損局部和促使KC高度增殖而表現出銀屑病特有的臨床及病理癥狀。
綜上所述，TLR2可能通過識別病原微生物感染參與銀屑病皮損的發生，而IL8可能是參與銀屑病皮損形成的重要細胞因子。病原微生物可引起外周血單個核細胞TLR2基因表達上調，啟動天然免疫應答，進而影響后繼的獲得性免疫應答，參與銀屑病免疫、炎癥反應，最終可能導致銀屑病皮損的發生和發展。對TLR2的進一步研究，將有助于闡明銀屑病的病因和發病機制，從而為臨床提供更加積極有效的預防及治療措施，并將為抗TLR2單克隆抗體的制備及應用提供可能的理論依據。但有關感染與銀屑病的關系及TLR在銀屑病發病中的作用還有待于進一步研究。
【參考文獻】
［1］ROSENBERG E W， NOAH P W， SKINNER R B. Psoriasis is a visible manifestation of the skins defense against microorganisms with ketoconazole[J]. J Dermatol， 1994，21:375379. [2]NETEA M G， VAN D E R， GRAAF C A， et al. The role of tolllike receptor TLR2 and TLR4 in the host defense against disseminated candidiasis[J]. J Infect Dis， 2002，185:14831489.
[3]BAKER B S， OVIGNE J M， POWLES A V， et al. Normal keratinocytes express Tolllike receptors (TLRs) 1，2 and 5:modulation of TLR expression in chronic plaque psoriasis[J]. Br J Dermatol， 2003， 148:670679.
[4]唐玲，于益芝，顧軍，等. 白介素8及其受體CXCR2在銀屑病角質形成細胞中的表達[J]. 中華皮膚科雜志， 2002，35:105107.
[5]WEISENSEEL P， PRINZ J C. Incidental detection of S pyogenesDNA in psoriatic skin by PCR[J]. Arch Dermatol Res， 2005，296(12):573576.
[6]BARONI A， ORLANDO M， DONNARUMMA G， et al. Tolllike receptor 2 (TLR2) mediates intracellular signaling in human keratinocytes in response to Malassezia furfur[J]. Arch Dermatol Res， 2006， 297(7):280288.
【關鍵詞】 顱腦損傷/分型;急性期;血炎性細胞因子/外周血
腦外傷患者急性期常伴有外周血炎性細胞因子表達變化[1-2],不同分型腦外傷患者上述指標表達也有明顯差異。筆者檢測了89例不同分型腦外傷患者急性期外周各血炎性細胞因子,現報告如下。
1 資料和方法
1.1 一般資料 選擇2007年1月至2009年5月在盤錦市第二人民醫院神經外科住院治療的腦外傷患者,納入標準:①發病后6 h內來本院首診。②年齡≥18歲。排除標準:①合并有其他嚴重軀體性疾病患者。②腦卒中史及再發腦外傷患者。③腦外傷后有嚴重的視覺和聽覺障礙表現。④有精神疾病或精神疾病家族史。⑤初中以下文化程度。腦外傷患者入選89例,男53例,女36例,年齡22～75,平均(45.80±7.44)歲。全部入選對象根據入院時GCS評分分為2組:輕型顱腦損傷組(GCS評分13~15分,55例),中、重型顱腦損傷組(GCS評分≤12分,34例)。
1.2 方法
1.2.1 格拉斯哥昏迷評分及血清炎性因子測定方法 ①格拉斯哥昏迷評分(GCS)包括運動、語言和睜眼3大部分指標,將3部分得分相加,即得到GCS評分,得分越低代表病情越重,評分時間在入院后6 h內進行。②血清炎性因子測定 入選患者均于入院1 d和7 d清晨空腹抽靜脈血6 ml,立即離心分離上清液,置-70℃冰箱保存,成批量統一檢測血清、TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量。測定血清IL-1、IL-6和IL-8含量采用ELISA法,試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供;測定TNF-α用放射免疫法,試劑盒由北京東亞生物技術研究所提供。
1.2.2 統計學方法 采用SPSS 10.0分析軟件對收集到的數據進行處理,觀察和統計數據用均數±標準差(x±s)表示,用t檢驗進行組間顯著性分析。
2 結果
不同分型腦外傷患者急性期外周血清炎性細胞因子變化比較見表1。
表1
不同分型腦外傷患者急性期外周血清炎性細胞因子變化比較(μg/L,x±s)
分組TNF-αIL-1
第1天第7天第1天第7天
輕型腦外傷組(n=55)1.06±0.09a1.03±0.10b0.17±0.02a0.26±0.04b
中、重型腦外傷組(n=34)1.15±0.121.31±0.170.24±0.030.38±0.06
作者單位:124000盤錦市第二人民醫院神經外科
分組IL-6
IL-8
第1天第7天第1天第7天
輕型腦外傷組(n=55)0.10±0.02a0.29±0.04a0.12±0.03b0.31±0.04b
中、重型腦外傷組(n=34)0.14±0.030.31±0.070.18±0.050.49±0.06
注:與中、重型腦外傷組比較:aP
3 討論
隨著汽車交通時代的提前到來和交通事故急劇增多,顱腦外傷也成了日常生活中的常見病和多發病。炎性反應是該病患者重要的病理生理過程,腦組織損傷后也有類似外周器官的免疫激活,釋放大量免疫調節物質,導致了創傷后粘附分子表達、細胞滲透、炎性表現均顯著增強。一般認為[1-2],急性顱腦損傷后外周血清炎性細胞因子變化主要來自于腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細胞介素(IL)-1、6和8的大量增加,促進炎性細胞的聚集和激活,增強嗜中性粒細胞及單核細胞的粘附作用,導致腦血管結構和血腦屏障的破壞,從而進一步加劇了顱腦損害。本研究以血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8為測試指標,選擇了89例腦外傷患者為觀察對象,并根據急性期格拉斯哥昏迷評分分組,觀察不同病情腦外傷患者住院后第1天和第7天外周各血炎性細胞因子表達,結果表明中、重型腦外傷組第1天和第7天血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8濃度均明顯高于輕型顱腦損傷患者。一些文獻[3-4]解釋這些表現常與腦外傷后腦組織水腫高峰期一致,傷后1周內血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8高水平表達提示腦損傷程度嚴重和預后差,而上述指標持續不降則說明繼發性腦損傷改變加劇,這些現象提示炎性細胞因子在腦外傷后繼發性腦損害經過中扮演重要角色。
鑒于不同分型腦外傷患者急性期常出現不同程外周血炎性細胞因子表達,后者還常被作為判斷腦損傷程度和預后的重要參考指標,同時抑制或減少顱腦損傷后炎性細胞因子的含量,還可作為治療中、重型顱腦損傷患者的可靠方法。因此監測顱腦損傷后患者血清中TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8濃度指標較為重要,對于臨床診斷、預后判斷以及指導顱腦損傷各時相遏制炎性反應干預治療,提高顱腦損傷救治水平都具有十分重要的意義。
參 考 文 獻
[1] 高玉松,袁紹紀,劉正義,等.顱腦損傷程度與血清中IL-6、TNF-α含量水平的關系.中國實用醫藥,2006,1(1):18-20.
[2] 杜笥鳳,吳挺前,王豐,等.急性顱腦損傷患者IL-1β、TNF-α含量變化與預后的關系.中國臨床神經科學,2006,14(3):307-308.
關鍵詞：多目標地球化學；SPSS；因子分析；地球化學分區；龍門縣
中圖分類號：P591 文獻標識碼：A 文章編號：1009-2374（2011）33-0071-03
多目標地球化學調查是針對第四紀覆蓋區開展的基礎性調查工作，主要包括基礎地質、資源潛力與生態環境等三大方面。測試結果包括54項元素的地球化學特征，具有信息量大，數據多的特點。如何處理大量數據，獲取不同區域地球化學特征是一項艱巨的任務。本文以廣東省惠州市龍門縣多目標地球化學調查成果為例，介紹了基于SPSS統計軟件的因子分析在地球化學分區中的應用。
一、多目標地球化學分區依據
1．地球化學分區依據在于：一是要基于介質的地球化學性質，二是要能夠反映表殼巖系的主要差異，三是要具備區域性的、連續性的分區特征。
2．地球化學分區應為環境、農業和資源等應用領域提供基礎地球化學依據。
3．陸域表層和深層土壤地球化學特征顯著，都對地質背景的地球化學性質繼承明顯，但表層土壤的樣品密度是深層的4倍，因此，采用表層土壤（原始數據）進行地球化學分區。
4．鑒于表層土壤經受了一定程度的生物作用和人為輸入作用，雖然作用不顯著，基本沒有掩蓋土壤的自然演變規律，但在利用元素地球化學數據進行分區時，不考慮TC、Corg、N、S、Br、Cl、Hg、Cd、I、B等10項指標（進行各分區統計量計算時，仍計算這些元素和指標）。
5．利用多目標地球化學調查其余的44項元素地球化學指標采用數學方法進行分區計算，盡量不進行人為干擾。
二、多目標地球化學分區方法
1．用因子分析的方法進行變量降維和指標組合，從指標組合特征尋求分區信息。
2．進行樣品聚類分析和判別分析，對樣品進行空間分類。
3．根據以上計算結果，結合其最擬合的背景因素（地質背景、土壤類型等）進行分區和綜合。
4．進行各區命名、地球化學特征歸納及不同應用領域的適宜性討論。
三、多目標地球化學分區過程
1．利用表層土壤44項元素和指標進行因子分析，按特征值大于1的限定共提取9個因子。其中，因子F1的元素組合為Th、U、Rb、Ga、Al2O3、Ti、Be、Tl、Cr、Nb、SiO2、Ce、Y、Ge、F、Sn、Na2O，方差解釋量達32%。由樣品因子得分圖（圖1）可知樣品得分值分為三部分，高值區（約大于0.27）與龍門縣西部早白堊世花崗巖分布區相吻合，低值區（約小于-0.28）與龍門縣第四系、泥盆紀及石炭紀等的沉積巖相吻合，中值區（0.27～-0.28）與其他古生界地層、中生代火山巖、花崗巖、堿入巖和變質巖等相吻合。可見，因子分析結果反映了龍門縣的元素地球化學分布總體特征，為地球化學分區提供了基礎框架。
2．以上計算表明，龍門縣表層土壤對地質背景的反映靈敏，根據表層土壤地球化學特征進行地球化學分區切實可行。據此，進行三個地球化學區劃分，即“地派－南昆山地球化學區”――為龍門西部火山巖分布區，“藍田－左潭－路溪地球化學區”――即古生界地層、中生代火山巖、花崗巖、堿入巖和變質巖地區化學區，“平陵－龍華－麻榨地球化學區”――即龍門東南部至西南部第四系、泥盆紀及石炭紀等的沉積巖分布區。各地球化學區主要以地質界線劃分，同時省去各區內其他零星的地質背景區（圖1，圖2）。
四、地球化學分區結論
表層土壤中54項元素和指標在不同地球化學區和亞區中的原始含量水平及分布特征各有不同，結合地形地貌等因素，不同地球化學區和亞區的農業、環境和資源的適宜性也各不相同。
（一）地派D南昆山地球化學區
1．該區S、Cl、Fe2O3、Zn、I、Mo、Se、F、Br、La、Ge、Sn、Ga、Tl、Be、Th、U、Ce、Zr、Y、Nb、Rb、Al2O3、W含量為全區最高，CaO、P、MgO、SiO2、Co、V、Pb、Sr、Ba、Ti、Sc含量為全區最低。
2．在農業生產方面，本區為中低山和丘陵地貌，地形起伏大，不利于連片種植和灌溉，因此農業生產條件較差，可發展林地和園地等管理粗放型農業，土壤主要為花崗巖風化土，土壤較其他地球化學區作物營養元素N、P、S、Corg和有益元素Mn、Br、I等含量均較少，因此，土壤肥力不好，應廣施復合肥等。值得注意的是該地區富含Se元素，應進一步追蹤Se元素的分布特征，發展富硒特色農作物的種植。
3．在環境方面，重金屬元素除了Zn以外含量均少，潛在放射性元素U、Th含量較高，標準差又很大，因此局部地區存在放射性污染環境質量安全威脅。
4．在資源方面，稀土元素La、Ce及Zn、W、Sn、Mo等元素含量最高，元素組合特征明顯，因此，形成火山巖型及其次生作用類型的貴金屬或有色金屬礦產可能性大。其次，Al2O3的含量為各地球化學區最高，標準差也最大，加上土壤在熱帶條件下強烈而又持久的脫硅富鋁作用，有可能在局部形成鋁土礦床。
（二）藍田－左潭－路溪地球化學區
1．該區K2O、Na2O、MgO、Mn、Co、Bi、Sr、Ba、Sc的含量為全區最高，TC、Corg、N、S 、Fe2O3、Cu、Se、Cr、Ni、Cd、Sb、Hg、As、Li、Zr、Ag、Au、B的含量為全區最低（表1）。
2．在農業生產方面，本區為山地地貌，主要為花崗巖風化土，土壤粘度極低，透水性好，不易保水保肥，因此農業生產條件較差；土壤中作物營養元素、有益元素等含量最低，土壤肥力差，應廣施各類肥料，確保農業豐收；上述元素的含量分布標準差大小不一，這就意味著元素含量空間分布的均勻性不確定，可能存在局部富集地區，因此要加強土地特別是農業用地利用規劃，為農業高產高效和安全生產提供科學決策。
3．在環境方面，重金屬元素及放射性元素含量少，因此在該區應大力發展綠色無公害農產品。
4．在資源方面，Mn元素含量最高，元素組合特征不明顯，因此，形成火山巖型及其次生作用類型的貴金屬或有色金屬礦產可能性不大。
（三）平陵－龍華－麻榨地球化學區
1．該區TC、Corg、N、CaO、P、SiO2、Cu、Cr、V、Ni、Cd、Sb、Hg、Pb、As、Li、Ti、Ag、Au、B的含量為全區最高，K2O、Cl、Na2O、Zn、Mn、I、Mo、F、Br、La、Ge、Sn、Ga、Bi、Tl、Be、Th、U、Ce、Y、Nb、Rb 、Al2O3、W的含量為全區最低（表1）。
2．在農業生產方面，本區為臺地地貌類型，地形起伏不明顯，水資源較豐富，土壤高粘性，透水性差，易于蓄積水源用于灌溉，因此農業生產條件較好，農業經濟發達；土壤較其他地球化學區具最高含量的作物營養元素N、P、Corg和有益元素Cu、B等，同時K2O、Na2O等的含量最低，因此，土壤肥力最好，但應廣施鉀肥。
3．在環境方面，Cr、Cu、Hg、Ni、As、Cd等重金屬元素含量相對最高，標準差又很大，因此局部地區存在上列重金屬元素環境質量安全威脅。這些有毒有害重金屬元素主要與工業三廢的排放、農業生產施肥及農藥有關，這就為如何科學合理開發利用土地資源提出了新的問題，應開展深入的土壤環境地球化學研究，倡導合理的農業生產。
4．在資源方面，Au、Ag、Cu、Pb、As元素含量最高，元素組合特征明顯，因此，形成火山裂隙充填型及其次生作用類型的貴金屬或有色金屬礦產可能性較大。
參考文獻
[1] 奚小環．多目標區域地球化學調查與生態地球化學――第四紀研究與應用的新方向[J]．第四紀研究，2005，（3）．
[2] 時艷香，紀宏金，陸繼龍．水系沉積物地球化學分區的因子分析方法與應用[J]．地質與勘探，2004，40（5）．
[3] 薛薇．SPSS統計分析方法及應用[M]．北京：電子工業出版社，2004．
[4] 董毅．因子分析在水系沉積物測量地球化學分區中的應用探討――以青海都蘭地區為例[J]．礦產與地質，2008，22（1）．
[5] 顧錫蓮，許光，李延軍．因子分析在小盆地――野馬泉地區成礦潛力評價中的應用[J]．西部探礦工程，2008．
