時間：2023-02-27 11:15:57
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7月中旬，據德國《明鏡周刊》披露，大眾汽車以80億歐元收購保時捷跑車業務。一周以后，保時捷監事會也發表了聲明：保時捷CEO文德金正式下課，原因是“如果他不再繼續任職，對保時捷未來的戰略發展將更加有利”。
此消息一出，全世界都為之震驚，這證實了保時捷控股陷入沉重債務危機的傳聞。保時捷家族不得不以出售跑車業務給大眾汽車的方式來降低保時捷高達百億的負債。根據兩個公司達成的協議，雙方將組成一家新的汽車公司――“大眾―保時捷”。
“汽車教父”費迪南德?保時捷
他是大眾“甲殼蟲”的設計者，也是保時捷的奠基人；他為希特勒設計過戰車，也為老百姓設計買得起的汽車。
大眾收購保時捷，對于好事者來說，已經超越了簡單的商業收購范疇，隱藏在背后的家族紛爭，才是真正的話題。提起這兩大汽車品牌，就不得不從一個關鍵人物說起，這就是保時捷和大眾的奠基人、“汽車教父”費迪南德?保時捷。
費迪南德?保時捷1875年出生于捷克，家中排行老三，父親是當地一個鐵匠。他年輕時就顯露出對機械制造的天分和興趣。小學畢業后，便在父親的工場做學徒，白天幫父親干活，晚上到維也納技術學校上夜校，這也是他接受到的唯一的系統的工程訓練。
1898年，費迪南德加入位于維也納的Ludwig Lohner公司，并于1899年開發了名為Lohner-Porsche的電動汽車，這是第一部以“保時捷”命名的汽車，是如今大紅大紫的電動汽車的雛形，一舉奠定了費迪南德?保時捷“汽車教父”的地位。
1906年，費迪南德來到奧地利的戴姆勒汽車公司，并于1916年升至分公司的總裁。1926年，戴姆勒汽車與當時的奔馳汽車合并，新公司董事會決定大力開發豪華型轎車，而費迪南德的目標卻是設計生產所有老百姓都買得起的汽車。這一想法自然受到了董事會的否決，1929年費迪南德離開了。1931年4月，費迪南德在德國斯圖加特成立了自己的“保時捷發動機與飛機設計有限責任公司”，這便是保時捷公司的前身。
1933年1月，希特勒上臺僅11天就親自主持了柏林汽車展的開幕式，并發表演講表示要創造一種全新的“國民轎車”。這與費迪南德的想法不謀而合，希特勒親自點名由費迪南德主導設計，并要求他在28個月內拿出樣車。1935年柏林汽車展上，希特勒宣布了“國民轎車”即將到來的消息。在這里，他第一次使用了“大眾汽車”一詞。1936年10月，3輛樣車終于按時完成，這就是以后風靡壘球的“甲殼蟲”。于是希特勒決定在德國中部沃爾夫斯堡建立工廠，新工廠命名為“大眾汽車”，費迪南德出任總工程師，1939年7月開始正式生產“甲殼蟲”汽車?？刹坏揭粋€月生產就停止了。因為希特勒已經決心發動世界大戰，汽車廠轉眼變成了兵工廠，費迪南德不得不為希特勒設計軍事戰車，包括他為希特勒設計了威震歐洲戰場的“虎式坦克”和“象式坦克殲擊車”。
此時的費迪南德全身心投入在沃爾夫斯堡的大眾汽車公司上，位于斯圖加特的保時捷跑車設計的工作便交給了兒子費里?保時捷，父子分別掌管大眾和保時捷。因為和德國納粹的關系，二戰結束后，費迪南德、他的兒子費里，以及女婿安東?皮耶希都被美國人以戰爭罪行逮捕，隨后被交給了法國，幫助當時的雷諾開發新車。兒子費里在監獄度過3個月后被釋放，費迪南德和女婿則繼續被關押在法國。
此時從都靈來了一份活――意大利跑車公司Cisitalia的總經理Piero Dusio委托費里設計一款賽車。費里用設計這輛車賺來的錢將骨瘦如柴的老父親從法國的監獄贖了回來。在給法國人免費打了20個月的工后，一家人終于又團聚了。
1947年，兒子費里正式接替父親成為保時捷的主席。而費迪南德則在兒子的攙扶下，戰旨首次回到仍在英國人占領之下的沃爾夫斯堡，回到了大眾汽車。這是個讓他實現畢生夢想的地方，也是讓他深陷囹圄的地方?？粗约寒斈暝谝粡埌准埳辖ㄔ炱饋淼墓S和流水線上大量生產的“甲殼蟲”，費迪南德百感交集。由于常年埋頭于設計，加上法國監獄惡劣的生活條件，費迪南德的健康受到很大的損害。不久，費迪南德中風，并于1951年1月30日在沃爾夫斯堡逝世。終年77歲。
家族的分裂
費迪南德有一子一女，女兒路易絲和女婿安東?皮耶希一直打理著大眾的業務，兒子費里一直專注于保時捷的跑車設計，兩個二代繼承人分工明確，相處和諧。但到了第三代，幾個表兄弟之間爭權奪勢，將這個家族一分為二――“保時捷”家族和“皮耶?！奔易?。
費迪南德去世之前，他的女兒路易絲?皮耶希和女婿安東?皮耶希一直在奧地利全力打造大眾汽車進口業務。費迪南德去世后，姐姐路易絲和弟弟費里各擁有保時捷公司50％的股份，這也就為以后保時捷和皮耶希家族之爭埋下了伏筆。1952年，也就是費迪南德去世一年后，女婿安東?皮耶希也在奧地利去世。路易絲接過丈夫留下的擔子，全權負責大眾汽車銷售業務，而費里則全身心投入到保時捷跑車設計生產上。
費里與妻子朵羅絲?雷茲共育有4子，而姐姐路易絲也有3個兒子1個女兒。隨著兩個家族第三代繼承人逐漸加入到公司的管理層，表兄弟之間為了公司領導權的爭斗也越來越激烈。首先要說的便是現任大眾汽車監事會主席小費迪南德?皮耶希，他是路易絲的兒子。1963年4月大學畢業后，他開始在自己家族的跑車公司工作。他是個沖勁很足的年輕人，從最底層做起，短短幾年時間，不僅掌管了賽車部，而且還管理著一個有200名汽車工程師的部門。盡管一直飽嘗資金不足和人手不足的雙重壓力，但他仍然堅持了下來，并最終獲得了成功。
皮耶希的對手是舅舅費里的大兒子，比自己大兩歲的表哥亞歷山大?保時捷。這個隨遇而安的年輕人也跟這個家族的其他人一樣愛車，他全身心投入到藝術設計中。1981年，亞歷山大便完成了保時捷經典車型911的外形設計，創造了跑車史上的經典。但他對權力的追求遠遠不如自己的表弟，對公司政治基本上毫無興趣，面對皮耶希的緊逼之勢，保時捷一家總是落于下風。
盡管皮耶希在事業上取得了成功，但是他跋扈的風格，花錢大手大腳的習慣也惹怒了保時捷家族的一些成員。1972年，眼看著繼承權的爭斗即將給公司帶來嚴重后果的嚴峻時刻，為了平息事態，維持公司的長遠發展，費里無情地解雇了好斗的外甥，并決定保時捷公司從此將由非家族成員進行管理。
【摘要】 目的 構建銅綠假單胞菌發光菌株，建立銅綠假單胞菌生物膜(biofilm，BF)模型，研究鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌成熟BF的影響及與環丙沙星合用是否具有協同殺菌作用。方法 將攜帶綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的質粒轉染銅綠假單胞菌，平板培養法培養銅綠假單胞菌BF，建立銅綠假單胞菌BF體外模型，經鹽酸氨溴索作用后，掃描電鏡(scanning electron microscope，SEM)觀察鹽酸氨溴索對BF形態結構的影響，熒光顯微鏡定性觀察鹽酸氨溴索對BF內活菌的作用，通過發光菌株熒光強度定量分析鹽酸氨溴索單獨作用以及與環丙沙星聯用后BF內活菌量。結果 鹽酸氨溴索作用后電鏡觀察可見黏液樣物變稀疏，不規則。鹽酸氨溴索濃度大于0.49mg/mlBF內活菌數減少(F=18，P
【關鍵詞】 鹽酸氨溴索； 環丙沙星； 銅綠假單胞菌； 生物膜
ABSTRACT Objective To establish a biofilm model of Pseudomonas aeruginosa in vitro and observe the effect of ambroxol on biofilm of Pseudomonas aeruginosa， and study the synergistic effect with ciprofloxacin on tested specimens. Method Plasmids carried with green fluorescent protein (GFP) was tansfected to the strain of Pseudomonas aeruginosa. Plate culture method was used to establish biofilm model of Pseudomonas aeruginosa in vitro. After ambroxol was added to the biofilm， the appearance of the biofilm was detected by scanning electron microscope (SEM)， and the viable counts of bacterial in biofilm after treated by ambroxol alone and together with ciprofloxacin were determined by bio-fluorescence method. Result After adding ambroxol， the biofilm was thin and abnormal compared with the control by SEM detection. Further detection with fluorescence microscope showed the viable bacteria in biofilm was reduced significantly (F=18， P
KEY WORDS Ambroxol; Ciprofloxacin; Pseudomonas aeruginosa; Biofilm
生物膜(biofilm，BF)是細菌黏附在物體表面上形成的一種具有高度結構性的膜狀復合物，其主要成分是細菌分泌的胞外基質和細菌菌體［1］。BF可使細菌具有抵御宿主免疫系統和抗菌藥物殺傷作用，產生對抗菌藥物的高度耐藥性(可達到浮游狀態的10～1000倍)，導致感染難以治愈［2］。銅綠假單胞菌是常見細菌生物膜相關感染病原菌之一，銅綠假單胞菌生物膜的形成是呼吸機相關性感染難以控制的重要原因。作者曾研究氨溴索可顯著促進環丙沙星對細菌生物膜的透過［3］，本研究發現鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF有抑制作用，且與環丙沙星聯用后具有協同作用，增強殺菌活性，現報道如下。
1 材料和方法
1.1 材料
菌株PAO1(購自四川大學微生物實驗室)，Luria-Bertani培養基(LB，上海升博生物技術公司)，鹽酸氨溴索標準品(德國Boehringer Ingelheim)；環丙沙星標準品(重慶市藥品檢定所)，比濁儀(德國Siemens公司)，多功能酶標儀(美國BIORAD UV-3350型)，熒光顯微鏡(德國Leica公司)，SEM(美國Amary公司)，24及96孔培養板(美國Coring公司)。
1.2 方法
(1)構建GFP標記的PAO1菌株 采取電轉化對PAO1進行GFP)標記。首先制備感受態PAO1，然后進行菌株pGFPuv質粒轉化和轉化菌株篩選，提取轉化菌株中質粒和轉化菌株中質粒雙酶切電泳鑒定，檢測轉化菌株中質粒穩定性。本實驗獲得較穩定遺傳的GFP標記的PAO1菌株。
(2)環丙沙星最低抑菌濃度(MIC)的測定 采用微量稀釋法測定環丙沙星對銅綠假單胞菌的MIC，質控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853。
(3)銅綠假單胞菌BF體外模型的建立 用平板法培養銅綠假單胞菌BF［4］。取隔夜培養的含有銅綠假單胞菌的LB培養液，調至1.5×108CFU/ml。分別吸取菌液1ml加入24孔板(其內放8mm×8mm玻片)，0.1ml加入96孔板。37℃培養，每48h換液一次，連續培養7d，即可形成穩定成熟的BF［5］。
(4)銅綠假單胞菌BF形態的SEM檢測 本部分實驗分為兩組［對照組和鹽酸氨溴索組(濃度3.75mg/ml)］。兩組用平板法培養細菌7d，在24孔板內分別加入1ml LB培養基和鹽酸氨溴索，37℃孵育24h后取出，用磷酸緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)反復清洗，去除浮游菌。立即用2．5%戊二醛PBS溶液中固定2h，再經0.1mol PBS沖洗2次(pH7.2)，30%～100%系列濃度乙醇脫水，經50%～100%叔丁醇置換，干燥、離子濺射儀噴金，經過SEM觀察銅綠假單胞菌BF微觀形態。
(5)熒光顯微鏡定性觀察細菌BF內活菌數 本部分實驗分為6組［空白對照組，不同濃度的鹽酸氨溴索作用組(濃度依次為3.75、1.875、0.95、0.49和0.25mg/ml)］。在24孔板加入1ml菌液，平板法培養7d，分別加入1ml上述濃度的鹽酸氨溴索和LB培養基，37℃孵育24h取出，用PBS反復清洗，去除浮游菌，取出玻片，置熒光顯微鏡下觀察。
(6)多功能酶標儀定量分析鹽酸氨溴索與環丙沙星合用后細菌BF內活菌數 細菌培養7d，棋盤法在96孔板內分別加入0.1ml不同濃度的鹽酸氨溴索(濃度依次為3.75、1.875、0.95、0.49、0.25和0mg/ml)和環丙沙星(濃度依次為4、2、1、1/2、1/4和0MIC)，37℃孵育24h取出，用PBS反復清洗，去除浮游菌，用多功能酶標儀檢測各孔熒光強度。
(7)統計學分析 所有數據輸入SPSS11.5統計軟件包，并行正態性分布檢驗，均符合正態性分布，后進行方差分析，顯著性水平α=0.05。
2 結果
2.1 環丙沙星的MIC測定
環丙沙星的MIC為1μg/ml。
2.2 SEM觀察銅綠假單胞菌BF形態
經過各組處理后銅綠假單胞菌BF進行SEM觀察可以看出，細菌培養7d后形成成熟的BF。對照組BF在載體表面形成片狀物，周圍有厚薄不均的黏液狀物質連接成一大片，其內包裹大量細菌;鹽酸氨溴索處理組銅綠假單胞菌BF變得稀疏，結構簡單，僅見少量散在細菌。
2.3 熒光顯微鏡觀察鹽酸氨溴索對成熟BF的影響
預置8mm×8mm玻片的24孔板內接種等量的細菌，培養7d后加入不同濃度的鹽酸氨溴索作用24h后取出玻片，洗去浮游菌，振蕩破壞BF，使其內細菌游出，置熒光顯微鏡下觀察(×200)，取隨機視野，結果顯示，隨著濃度的升高，細菌減少；當濃度達到0.5mg/ml時，與生理鹽水對照組大致相當。
2.4 多功能酶標儀定量檢測BF內活菌熒光強度
隨著鹽酸氨溴索濃度的升高，培養板內細菌的熒光強度下降，說明BF內活菌減少，統計分析顯示當鹽酸氨溴索濃度達到0.49mg/ml時，與對照組存在差異(單因素方差分析，P
鹽酸氨溴索單獨以及與環丙沙星聯用后BF內細菌熒光強度圖1中6條曲線代表不同濃度的鹽酸氨溴索作用下，在環丙沙星濃度從0～8MIC變化時熒光強度的變化趨勢。從圖中可以看出，鹽酸氨溴索與環丙沙星存在協同作用(隨著鹽酸氨溴索濃度升高，在同一環丙沙星濃度所對應的熒光強度，隨之降低)，且隨著鹽酸氨溴索濃度升高，協同作用增強。
3 討論
近年來由呼吸機輔助通氣的使用增加，導管相關性感染問題日益突出。銅綠假單胞菌是常見的形成BF菌類之一，形成BF后，由于其滲透限制作用［1］，以及其內細菌所處的微環境改變［5］等原因，導致細菌耐藥性增強，難以清除。盡管國外有報道鹵代呋喃唑酮［6］及藻酸鹽抗體［7］等有破壞BF的作用，但尚未應用于臨床治療，因此，尋找一種有效可行抗銅綠假單胞菌BF的臨床用藥具有極為重要的意義。國外報道，化痰藥N-乙酰半胱氨酸干擾生物膜形成［8］，鹽酸氨溴索作為一種臨床常用的化痰藥與N-乙酰半胱氨酸作用機制上有一定的相似性，推測鹽酸氨溴索可能具有抗BF作用。本文將攜帶GFP的質粒轉染PAO1，構建銅綠假單胞菌發光菌株，采用平板培養法，7d后得到成熟的BF。SEM觀察顯示，在鹽酸氨溴索的作用下，成熟的BF變得稀疏，不規則，說明一定濃度的鹽酸氨溴索可影響BF的形態，破壞其結構的完整性。同時采用生物發光法直觀地觀察鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF內活菌的影響，結果發現隨著鹽酸氨溴索濃度的升高，BF內黏附的活菌減少，說明鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF有破壞作用。臨床上常用抗生素如環丙沙星對BF狀態的銅綠假單胞菌的殺滅作用不強。用多功能酶標儀檢測不同濃度環丙沙星與鹽酸氨溴索聯合應用的對細菌的作用，結果顯示它們具有協同抑制作用，且隨著鹽酸氨溴索濃度升高，協同作用增強，BF內活菌進一步減少，環丙沙星的殺菌活性增強。這可能與鹽酸氨溴索破壞BF結構的完整性，增強了環丙沙星對BF的穿透能力，提高了環丙沙星對BF中細菌的殺滅能力。由此認為，鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF有破壞作用，與其他抗生素聯用可以提高其殺菌能力，為鹽酸氨溴索的抗BF應用提供了理論基礎，為新生兒難治性銅綠假單胞菌感染的臨床治療提供新的思路。對于鹽酸氨溴索抗BF的作用推測可能與其對BF胞外基質的合成和結構維持的影響有關，具體機制還有待進一步研究。
參考文獻
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【關鍵詞】 人參皂苷Rb1；，，芳維甲酸乙酯；，，基質金屬蛋白酶；，，成纖維細胞；，，免疫組織化學
摘要：目的通過人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯對皮膚真皮體外培養光老化成纖維細胞胞質內基質金屬蛋白酶表達的影響，闡明人參皂苷Rb1對光老化的防治機理，探索光老化的防治手段。方法建立體外培養真皮成纖維細胞光老化模型，用人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯進行干擾，免疫組織化學技術顯示基質金屬蛋白酶的表達的改變。結果人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯對培養成纖維細胞胞質基質金屬蛋白酶的表達有顯著抑制作用（P0.05)。結論人參皂苷Rb1對光老化成纖維細胞具有與芳維甲酸乙酯相似的防治作用，其機理與芳維甲酸乙酯的作用機理可能相同或者相似，及通過調節MMPs活性防治皮膚光老化。
關鍵詞：人參皂苷Rb1； 芳維甲酸乙酯； 基質金屬蛋白酶； 成纖維細胞； 免疫組織化學
Comparative Study of the Effect of the Ginsenoside Rb1 and Arotinoid Ethyl Ester on the Expression of MMPs in Sun-induced Aging Dermis Fibroblasts
Abstract：ObjectiveTo explore the methods of prevention and cure of sun-induced aging dermis， and clarify the mechanism of Ginsenoside Rb1 on sun-induced aging dermis， with the study of expression of matrix metallo preteinases in sun-induced aging dermis fibroblasts' cytoplast， which are cultured in vitro， under the effect of Ginsenoside Rb1 and arotinoid ethyl ester. MethodsBuild the dermis fibroblasts sun-induced aging model， and affect the cells with Ginsenoside Rb1 and arotinoid ethyl ester， and display the change of expression of matrix metallo preteinases with immunohistochemistry. ResultsGinsenoside Rb1 and arotinoid ethyl ester had significant inhibition effect on the expression of matrix metallo preteinases in the fibroblasts' cytoplast cultured in vitro（P0.05). ConclusionGinsenoside Rb1 has effect of prevention and cure of sun-induced aging dermis's fibroblasts like the arotinoid ethyl ester， and its mechanism is the same as or like the arotinoid ethyl ester through regulating the expression of matrix metallo preteinases.
Key words：Ginsenoside Rb1; Arotinoid ethyl ester; Matrix metallo preteinases; Fibroblast; Immunohistochemistry
皮膚老化是人體衰老的主要表現之一，也是目前人們極為關注的話題。長期反復的紫外線照射是皮膚光老化的重要因素，皺紋形成是皮膚光老化的最為重要特征。研究皺紋形成機理對防治紫外線輻射損傷及皮膚老化有重要意義。維甲酸對光老化皮膚的治療作用已經被大量的研究所證實，并且已經應用于臨床，但有研究表明維甲酸雖然已經經歷了幾代，仍然有許多很難克服的毒副作用［1~3］。人參具有保護機體細胞和全身免受應激的影響，降低血糖和血膽固醇，促進新陳代謝等功能，目前已經廣泛應用于臨床的許多方面，包括在很多皮膚保健品和化妝品內［4，5］。本研究通過用人參的有效成分之一―人參皂苷Rb1（Ginsenoside Rb1）與芳維甲酸乙酯（arotinoid ethyl ester）的對比研究，目的在于闡明人參皂苷Rb1防治光老化的可能機理，探索更為有效的皮膚光老化的防治方法。基質金屬蛋白酶(matrix metallo preteinases，MMPs)在各種生理、病理條件下細胞外基質降解和重塑中起著關鍵作用，可以降解含或不含膠原成分的皮膚真皮細胞外基質。有研究表明，在在體實驗和細胞培養實驗中， MMPs在衰老皮膚真皮成纖維細胞（fibroblast；FB）的表達明顯增強，說明其在衰老發生及皺紋形成過程中有重要作用，尤其是MMP1和MMP3［6，7］。在本研究中選擇MMP1和MMP3作為光老化皮膚真皮的老化程度指標進行研究。
1 材料與方法
1.1 取材健康新生兒包皮真皮。
1.2 主要儀器設備與試劑芳維甲酸乙酯（購于市場），溶于吐溫20 (山西省天星生化藥業有限公司)；人參皂苷Rb1（中國醫科大學化學教研室），溶于二甲基亞砜；MMP1和MMP3免疫組織化學試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）；8甲氧補骨脂素(8MOP)；四唑鹽(MTT)試劑；等。紫外線功率測定儀（上海西格瑪高技術公司）；二氧化碳培養箱；長波紫外線（UVA）燈管；等。
1.3 細胞培養及分組處理細胞培養、細胞復蘇、細胞傳代等實驗方法，細胞接受紫外線照射、8MOP、芳維甲酸乙酯、人參皂苷Rb1等藥物處理等實驗方法，確定無毒性紫外線照射劑量、8MOP、芳維甲酸乙酯、人參皂苷Rb1等藥物的最佳作用濃度、選擇作用時間等實驗方法，完全參照文獻［8］進行。具體分組及各組處理方法：正常對照組（control group；CG）；陽性對照組（masculine group；MG）：UVA+8MOP；維甲酸實驗組（arotinoid ethyl ester treatment group；AG）：UVA+8MOP+芳維甲酸乙酯；人參皂苷Rb1實驗組（Ginsenoside Rb1 treatment group；GG）：UVA+8MOP+人參皂苷Rb1。人參皂苷Rb1劑量為20，50，100 μg/ml（分別為GG1，GG2，GG3三組），作用時間為48 h。
1.4 免疫組織化學實驗SABC法顯示各組MMP1和MMP3。步驟：中性甲醛固定培養細胞20 minTriton-100打孔3%雙氧水滅活內源性酶7 min，蒸餾水洗抗原修復液修復抗原，水洗滴加正常山羊血清滴加一抗（1∶200）孵育，pH7.3、0.01M PBS洗滴加二抗（1∶100）孵育，PBS洗DAB避光顯色，鏡下控制顯色時間蒸餾水終止顯色，充分洗脫脫水，封片［8］。
1.5 結果觀察與圖像分析用光學顯微鏡對各組切片進行形態學觀察，并采用盲法用IS4400圖像分析儀，在400倍下進行圖像分析。檢測：(1)光密度（反映染色深淺）；(2)陽性反應區域與陰性反應區域比值(PNarea；PNarea與反應的強度無關，代表陽性著色顆粒的相對面積，可以反映陽性率)。均用±s表示。
1.6 統計學分析對以上結果用SPSS10.0 For Windows方差分析進行統計學檢驗，再用SNK q法進行組間比較。
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2 結果
在光學顯微鏡下觀察HE染色后的各組細胞，細胞密度沒有明顯的差異，細胞直徑約20～35 μm。細胞形態呈星形，有3~7個突起，細胞核位于細胞的中央，體積較大。在HE染色條件下，細胞胞質呈弱嗜堿性。細胞周圍可以看到少量纖維。在8MOP與紫外線作用后2 h后，培養成纖維細胞逐漸出現細胞老化的形態學改變，表現為細胞體積實質性增大，胞質內出現一些顆粒，細胞核體積略為減小，染色逐漸加深。在免疫組織化學染色切片中，可以看到各組成纖維細胞內部MMP1和MMP3陽性產物，分布在細胞胞質內，呈棕黃色顆粒。其表達48 h最強，然后逐漸減弱，72 h逐漸恢復。免疫組織化學染色圖像分析光密度和膠厚面積結果（表1）所示，陽性對照組MMP1和MMP3表達明顯增強，與對照組之間差異有顯著性（P
表1 48 h各組成纖維細胞MMP1和MMP3免疫組織化學染色光密度（略）
與MG比較， *P0.05；n=24
3 討論
有研究表明［7］，在8MOP與UVA的共同作用下，可迅速誘導體外培養真皮成纖維細胞衰老，為研究皮膚光老化提供了很好的體外培養細胞老化的實驗模型。在該實驗的研究結果顯示，8MOP與UVA共同作用條件下，培養真皮成纖維細胞2 h后，培養成纖維細胞逐漸出現細胞老化的形態學改變，表現為細胞體積實質性增大，胞質內出現一些顆粒，細胞核體積略為減小，染色逐漸加深。維甲酸對皮膚光老化的防治作用已被大量的研究所證實［1~3］。雖然維甲酸的發展和應用已經經歷了幾代，但維甲酸見光易分解、對皮膚刺激性強、起效較慢、具有導致畸形等等缺點使其應用受到了很大的限制。芳維甲酸乙酯為第三代維甲酸的重要代表，具有低有效劑量、副作用相對較少的特性，在臨床上已經廣泛用于皮膚光老化的防治。該研究以芳維甲酸乙酯作為對照進行研究，探索中藥人參提純品人參皂苷Rb1對皮膚真皮成纖維細胞老化的防治作用，有堅實的實驗基礎和理論依據。在正常生理情況下，結締組織產生的MMPs參與組織發育中的重構和組織損傷后的部分修復過程，避免間質水解引起組織過度損傷。有研究表明，在皮膚真皮的成纖維細胞胞質內，皮膚的損傷過程中有明顯的MMPs的表達，尤其是MMP1和MMP3。在該研究的中，經紫外線照射和8甲氧補骨脂素作用后，培養成纖維細胞胞質內的MMP1和MMP3的表達明顯增強，也證實其它研究者的實驗結果［6，7］。成纖維細胞胞質內出現了明顯的MMP1、MMP3的表達，以照射后48h最強，隨后逐漸減弱，72 h逐漸恢復。這和Fisher等［9］報道的自然條件下日光照射引起的改變相一致。這表明MMPs的表達增強可能是長波紫外線輻射損傷的重要機制，也提示通過研究MMPs失衡的機制并進行調控，可能為防治皮膚光老化提供新的思路。作為傳統名貴中藥的人參應用于臨床已有兩千多年的歷史。其內主要含有皂苷類。人參皂苷主要有Rb1，Rb2，Rc，Rd，Re，Rf等單體，大約有18種。除單體皂苷外還含有蛋白質、酶類、多肽、氨基酸、人參多糖等?，F代醫學證明人參皂苷具有抗腫瘤、調節免疫功能增強人體表面細胞的活力、抑制衰老等作用。中醫臨床上應用人參治療很多疾病，都有顯著的療效，但是其作用機制尚不完全清楚。國內對人參單體和化合物進行了一些基礎性研究，特別是近幾年有關人參皂苷的研究報道日益增多［4，5］。在該實驗中，結果表明人參皂苷Rb1對體外培養的真皮成纖維細胞胞質內MMP1、MMP3的表達的調節作用與芳維甲酸乙酯的相似，提示人參皂苷Rb1對皮膚老化可能具有與維甲酸相似的預防和治療作用，并且其作用機制與芳維甲酸乙酯的作用機制可能相同或者相似，與成纖維細胞胞質內的MMP1、MMP3有密切關系。但人參皂苷要全面應用于臨床皮膚光老化的防治，還需要進行大量的實驗研究，本實驗僅僅為此方面的研究提供一個新的思路和實驗基礎。
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