時間：2023-12-29 10:41:34
引言：易發表網憑借豐富的文秘實踐，為您精心挑選了九篇干細胞在臨床醫學中的應用范例。如需獲取更多原創內容，可隨時聯系我們的客服老師。
1急性白血病
白血病是起源于造血干細胞的惡性克隆疾病，受累細胞（白血病細胞）增殖失控、分化障礙及凋亡受阻，蓄積于骨髓及其他造血組織中，從而抑制骨髓正常造血并浸潤淋巴結、脾臟等器官，根據分化程度及自然病程可分為急性和慢性兩大類。多數急性白血病患者在經過化療誘導和鞏固治療后可達到完全緩解，但相當一部分患者在數月至數年內仍會復發。PML-RARa融合基因陽性的急性早幼粒細胞白血病（APL）除外，全反式維A酸（ATRA）的應用使患者預后得到巨大改善，Adès L等人指出APL患者使用ATRA+柔紅霉素+阿糖胞苷強化治療后2年無病生存率可達93%[2]。
NCCN指南根據細胞遺傳學及分子生物學將急性髓系白血病（AML）分為低危、中危及高危組。低危組AML患者在大劑量阿糖胞苷鞏固強化治療后繼續行維持化療，其無病生存率（DFS）可達到50~60%，且治療相關死亡率僅為8~10%[3]。EORTC/GIMEMA試驗中指出接受allo-HSCT和auto-HSCT的兩組中危AML患者的長期存活率相當，分別為62%、66%，而移植相關死亡率（TRM）分別為17%、6%[4]，allo-HSCT組的TRM明顯高于auto-HSCT，故認為低危AML患者不宜選擇行allo-HSCT治療，可選擇auto-HSCT或者維持化療。
接受維持化療的中危患者5年總生存率（OS）只有24%，而行allo-HSCT及auto-HSCT的患者5年DFS分別為48.5%、45.2%[4]，Farag等人[5]的研究中比較了auto-HSCT和大劑量阿糖胞苷兩組的5年DFS，其分別為41%、45%，故allo-HSCT、auto-HSCT及大劑量阿糖胞苷化療5年DFS相差不大，均可作為中危患者緩解后的一線治療，臨床上可根據中危AML患者綜合考慮。
臨床上認為急性淋巴細胞白血病患者不宜行auto-HSCT治療。在MRC UKALLⅫ/ECOG E2993臨床研究中，將無合適異基因供者的患者分為auto-HSCT及化療組，前者的5年總生存率（37%）明顯低于后者（46%），差異有統計學意義[6]。如果能找到合適的異基因供者，可首選allo-HSCT治療。
2淋巴瘤
淋巴瘤（lymphoma）是源于淋巴結和淋巴組織的免疫系統惡性腫瘤，根據組織病理學改變分為霍奇金淋巴瘤（HL）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）兩類。霍奇金淋巴瘤是目前治療效果較好、治愈率較高的惡性腫瘤，通過ABVD等方案化療聯合放療，患者可良好獲益。
常規化療可使50~70%的NHL患者獲得完全緩解，但僅有30%可長期無病生存，尤其是對于復發難治、高度惡性的NHL患者療效欠佳。Philip的研究中將對化療敏感的109例NHL復發患者分為auto-HSCT組和常規化療組，auto-HSCT組的5年DFS及OS分別為46%、53%，而常規化療組僅為12%、32%，明顯低于auto-HSCT組，差異有統計學意義[7]。一項Ⅲ期前瞻性隨機試驗SWOG S9704中將IPI評分高的彌漫侵襲性NHL患者隨機分為兩組，分別為6周期CHOP方案化療加auto-HSCT、8周期CHOP方案化療，因相關研究顯示加用利妥昔單抗（美羅華）能明顯提高CD20+的B細胞淋巴瘤患者的OS及DFS，故兩組中的相應患者采用RCHOP方案化療，結果表明兩組的2年DFS分別為69%、56%，差異有統計學意義[8]。綜上所述，治療失敗的NHL患者及復發難治性NHL患者的標準治療方案為大劑量化療聯合auto-HSCT，具有高危因素的CR1期患者的鞏固強化治療也可采用。
3多發性骨髓瘤
多發性骨髓瘤（MM）是一種骨髓中單克隆漿細胞大量增生，并分泌單克隆球蛋白，引起貧血、高鈣血癥、腎功能不全和骨病等臨床表現的疾病。
NMSG94、MRCM Ⅶ等多項研究得出auto-HSCT治療有效率明顯高于化療組，且無事件生存率及總生存期也明顯優于化療組, NCCN指南中已將auto-HSCT作為年輕MM患者的標準一線治療方案[9]。但其生存曲線上不存在平臺期，故學者們提出雙次自體造血干細胞移植（tandem auto-HSCT）。薈萃分析顯示tandem auto-HSCT可提高MM患者總的反應率及無事件生存期，并不能延長總生存期[10]。進一步分層分析，第1次移植未達到VGPR的患者可能于第2次移植后達到VGPR，而第1次已達到VGPR及以上的患者單次及雙次移植療效相當[11]。且因新藥的臨床應用，故認為僅第1次移植中未達到VGPR的患者推薦行tandem auto-HSCT。
Allo-HSCT可能是MM唯一治愈方法，因其有移植物抗骨髓瘤效應，但由于MM發病年齡偏大，重要臟器功能不全，且受供著來源及經濟影響，故不作為一線治療方案。如何能減低預處理強度、降低移植相關死亡率，同時能保留allo-HSCT的GVM效應，auto-HSCT序貫減低劑量allo-HSCT（auto-RIC-allo-HSCT）應運而生[12]。一項長期隨訪研究提示auto-RIC-allo-HSCT治療組的24月非復發死亡率稍高于單純auto-HSCT治療組，但其5年無病生存率及總生存率明顯高于auto-HSCT治療組[13]，故對于有條件的MM患者來說，auto-RIC-allo-HSCT治療是一個合適的選擇，有治愈MM的可能，值的進一步探索及研究。
綜上所述，造血干細胞移植在血液系統惡性腫瘤中的治療效果是肯定的，在某些疾病上已獲得非常好的療效。但如何提高患者移植前的緩解率、減少移植相關并發癥、延長無病生存時間及總生存期等問題還需廣大學者進一步探索和研究。
參考文獻：
[1]APPELBAUM F R,HERZIG G P,ZIEGLER J L,et al.Successful engraftment of cryopreserved autologous bone marrow in patient with alignant lymphoma[J].Blood,1978,52(1):85-95.
[2]ADS L,CHEVRET S,RAFFOUX E,et al.Is cytarabine useful in the treatment of acute promyelocytic leukemia? Results of a randomized trial from the European Acute Promyelocytic Leukemia Group[J].Journal of Clinical Oncology,2006,24(36):5703-5710.
[3]傅華睿，黃河．哪些急性白血病患者適合造血干細胞移植[J]．中華移植雜志（電子版），2010，04（2）：127-131
[4]EORTC and GIMEMA Leukemia Groups,SUCIU S,MANDELLI F,et al.Allogeneic compared with autologous stem cell transplantation in the treatment of patients younger than 46 years with acute myeloid leukemia (AML) in first complete remission (CR1):an intention-to-treat analysis of the EORTC/GIMEMAAML-10 trial[J].Blood,2003,102(4):1232-1240.
[5]FARAG S K.Outcome of induction and postremission therapy in younger adults with acute myeloid leukemia with normal karyotype:a Cancer and leukemia group B study[J].J Clin Oncol,2005,23(3):482-493.
[6]GOLDSTONE A H,RICHARDS S M,LAZARUS H M,et al.In adults with standard-risk acute lymphoblastic leukemia,the greatest benefit is achieved from a matched sibling allogeneic transplantation in first complete remission,and an autologous transplantation is less effective than conventional consolidation/[J].Blood,2008,111(4):1827-1833.
[7]PHILIP T,GUGLIELMI C,HAGENBEEK A,et al.Autologous bone marrow transplantation as compared with salvage chemotherapy in relapses of chemotherapy-sensitive non-Hodgkin's lymphoma[J].New England Journal of Medicine,1995,333(23):1540-1545
[8]STIFF P J,UNGER J M,COOK J,et al.Randomized phase III U.S./Canadian intergroup trial( SWOG S9704) comparing CHOP±R for eight cycles to CHOP ± R for six cycles followed by autotransplant for patients with high intermediate( H-Int) or high IPI grade diffuse aggressive non-Hodgkin lymph[J].J CLIN Oncol,2011,29(15):8001.
[9]鄒外一，李娟造血干細胞移植治療多發性骨髓瘤[J]．臨床血液學雜志，2012，25（7）：410-413
[10]KUMAR A,KHARFAN-DABAJA M,GLASMACHER A,et al.Tandem versus single autologous hematopoietic cell transplantation for the treatment of multiple myeloma:a systematic review and meta-analysis[J].Journal of the National Cancer Institute,2009,101(2):100-106.
[11]Single versus double autologous stem cell transplantation for multiple myeloma[J].The New England Journal of Medicine,2003,349(26):2495-2502
[關鍵詞] 骨組織工程；臍帶；間充質干細胞
[中圖分類號] R329 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）10（c）-0195-02
骨折及骨科疾病是臨床中較為常見的病癥，為患者帶來了一定身體痛苦與經濟負擔。目前臨床中針對骨折與骨科疾病的治療，主要采用自體移植、人工植入及異體移植等，但上述方式均存在一定缺陷。MSCs具強大的多向分化功能，能夠誘導分化成骨細胞，幫助提升骨折或骨科疾病的治療效果。在此背景下，對骨組織工程中臍帶間充質干細胞的應用進展進行分析具一定現實意義。
1 MSCs的分離與培養
1.1 MSCs的分離
吉林大學生物醫學工程學院的楊晨[1]對MSCs的分離進行了研究，首先在手術室收集得到足月分娩的、健康的、新鮮的胎兒臍帶，將其放于融入了濃度為0.1%雙抗的氯化鈉溶液中，在實驗室內對臍帶進行間充質干細胞分離。其次，將臍帶取出，浸泡于酒精內約5 min，后以碘酒進行充分擦拭消毒，置于氯化鈉溶液下反復清洗，直至血塊完全沖掉。將臍帶剪至2 cm/段的大小，以鑷子固定住臍帶邊緣，用剪刀小心剔除臍帶外膜，將內含的華氏膠組織分離出來。取膠完成后接著剔除臍帶內的血管，再次以氯化鈉溶液沖洗，或直接在融入了濃度為0.1%雙抗的氯化鈉溶液中進行，以保證操作的無菌性。
1.2 MSCs的培養
武漢大學中南醫院的胡培[2]等人對MSCs的分離、培養進行了研究，其MSCs分離操作與楊晨基本相同，華氏膠組織成功分離后，將其放入α-MEM培養液（內涵100 U/mL鏈霉素與青霉素、10%胎牛血清）中，在CO2濃度為5%、箱內溫度為37℃的培養箱內進行培養，根據細胞生長情況，以0.25%胰蛋白酶進行傳代培養。北京協和醫學院的李鐸[3]選擇將切成管狀的臍帶繼續切片，再將片狀臍帶組織切割致2～3 mm3，利用吸管逐一將碎狀臍帶組織植入T75培養瓶中，培養瓶已預先由D/F12培養基（內含有濃度為20%的FBS）包被完成，植入密度為每瓶20～25塊碎狀臍帶組織；再將培養瓶置于溫度為37℃，CO2濃度為5%的溫箱中，定時向箱內補充培養基（1 mL/d），每隔3 d全量換液。
哈爾濱第五醫院手外科分院的聶廣辰[4]等人對臍帶間充質干細胞生長曲線的繪制進行了研究，在細胞傳代培養至第3代時將其分別種植于6孔板的其中4孔中持續培養8 d，按MTT法對細胞的增值情況進行測定，當細胞增值密度飽和，細胞進入平頂期時停測。卓峰等人[5]在細胞增殖特定于曲線繪制的研究中提出，現階段培養MSCs普遍采用的方法包括酶消化法與培養法，對MSCs細胞進行初代培養，該過程消耗約2 w，當細胞融合率致80%時開始傳代培養，在細胞種植2～4 d時增殖趨勢最盛，傳至第15代時增殖速度開始減慢，至20代時增殖基本結束。早期的細胞增殖的潛伏期在植入后的36 h內，之后開始了成對增長（5～6 d），增殖密度達到飽和后進入到平頂期，綜上可知細胞增殖曲線呈“S”型。
2 MSCs的特征
2.1 細胞形態與生長特征
第二軍醫大學的胡凱猛[6]在顯微鏡下對MSCs的形態進行觀察，按貼塊法獲取初代細胞后對其進行種植，4～5 d后即可在貼塊下方觀察到沿瓶底生長的hUMSCs，種植7 d后能夠觀察到細胞數量不斷增多，主要呈小梭形及小三角形，繼續培養細胞漸成集落狀生長，且生長狀態較為均衡，邊界清晰，伴有生長暈。酶消化法培養下初代細胞生長速度較培養法快，通常2～3 d后即在瓶底出現細胞，7 d后由小梭形及小三角形變為多角形、紡錘形，且生長迅速，集落生長呈緊靠型。14～15 d后達到約85%的融合。MSCs胞漿較少，小梭形的形態較為顯著，細胞核周的顆粒物質較少，消化傳代完成后細胞解除集落樣生長，且分布均勻。
2.2 細胞免疫學特征
呂鵬飛等人[7]在關于細胞免疫學特征的研究中提出，MSCs的免疫學優勢顯著，主要表現在其可以脫離免疫抑制作用而沖破MHC屏障，將細胞植入遠交動物體內。在UCMSC的免疫學特征分析中，證實其對人外周血單核細胞、鼠脾細胞及純化T細胞等免疫細胞具有抑制作用，從而減緩其增殖速度。毛希宏[8]的相關研究證明MSCs表面的抗原存在非專一性，主要包括細胞因子與生長因子受體類、粘附分子類、整和素家族成員類與其他分子類等四大類，實驗結果表明UCMSCs中，CD29、CD73、CD44、CD13、CD105的陽性率超過90%，而CD134、CD45、CD11b則為陰性，在23代內的傳代培養中，各類細胞因子無明顯差異，證明UCMSCs在經過多代培養之后免疫學性質較為穩定。
2.3 細胞的誘導分化特征
hUCMSC的誘導分化能力較強，能夠實現多向分化，包括內胚層、中胚層與外胚層。在張亞斌等人[9]的細胞誘導分化體內研究中，證實hUCMSC能夠分化成為內皮細胞、心肌細胞、骨骼細胞、多巴胺能神經元細胞、神經細胞等，而在細胞誘導分化體外研究中，還發現hUCMSC可分化為成骨細胞、肝細胞、脂肪細胞、胰島樣細胞、生殖細胞、平滑肌細胞等，在研究hUCMSC分化成為成骨細胞時，發現在誘導過程中hUCMSC的ALP活性提升，且鈣結節與鈣沉積現象明顯，證明其具成骨細胞的誘導潛能。上述研究結果表明，hUCMSC誘導分化功能強大，在臨床中的應用價值與應用范圍明顯優于造血干細胞。
3 討論
骨組織工程是近年來臨床新興的學科，其中胚胎干細胞作為骨組織工程研究的熱點與重點，受到了臨床醫學界的廣泛關注。通過上述研究可知，MSCs分化潛能較高，在軟骨、成骨、韌帶、肌腱、肌肉、神經、心肌、肝等組織中均具誘導分化潛能，臨床應用前景廣闊。李素萍等人[10]相關研究發現，在標準的細胞培養環境下，MSCs能夠沿培養瓶進行增值，可以表達CD44、CD105及CD90，但不能表達HLA-DR、CD34及CD45，在體外培養時表現出成骨細胞的誘導分化潛能。
在此背景下通過改進現有MSCs誘導分化為成骨或軟成骨細胞的培養方式，或在已知干細胞的基礎上找尋新型干細胞，以提升胚胎細胞在骨組織工程研究中的合適度，成為目前國內外相關研究的探索目標。在現代生物科技快速發展的時代背景下，學者們一定可以尋找到理想的培養途徑或干細胞類型，不斷推動骨組織工程的發展前進。
[參考文獻]
[1] 楊晨.臍帶間充質干細胞的分離鑒定[D].長春：吉林大學，2013：9-11.
[2] 胡培.人臍帶間充質干細胞的分離培養與鑒定[J].生物技術通訊，2014，25（1）：87-90.
[3] 李鐸.人臍帶間充質干細胞分離培養方法的研究[D].北京：北京協和醫學院，2011：14-22.
[4] 聶廣辰.人臍帶間充質干細胞生物學特性及向成骨細胞分化的研究[J].中國傷殘醫學，2014，22（6）：48-52.
[5] 卓鋒.人臍帶間充質干細胞應用研究進展[J].中國矯形外科雜志，2012，20（1）：49-51.
[6] 胡凱猛.人臍帶間充質干細胞向造血細胞方向分化的研究[D].上海：第二軍醫大學，2012：21-23.
[7] 呂鵬飛，張光武.臍帶間充質干細胞在骨組織工程中的研究進展[J].中華臨床醫師雜志：電子版，2013，7（10）：4433-4435.
[8] 毛希宏.人臍帶間充質干細胞的培養鑒定及其向神經元細胞分化的研究[J].昆明醫學院學報，2011，32（1）：41-47.
[9] 張亞斌，解莉楠.人臍帶間充質干細胞研究進展及應用前景[J].生物技術通訊，2013，24（3）：437-438.
骨髓間充質干細胞(bonemarrowmesenchymalstemcell,MSC)是存在于骨髓中的具有高度自我更新能力和多相分化潛能的成體干細胞,又稱骨髓基質干細胞、間充質祖細胞。
1MSC的生物學特性
MSC具有高度自我更新能力和多相分化潛能,體外培養的MSC有快速黏附和克隆能力,可以在體外培養20~25代而沒有形態、生長曲線和免疫表型的明顯改變,且保持著細胞的染色體核型和端粒活性。MSC在體外誘導培養條件下,能夠向不同譜系的細胞分化,如成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌腱細胞、星形膠質細胞等[1]。
2MSC的免疫學特性
由于MSC不表達主要組織相容性復合體(MHC)Ⅱ分子、CD40、CD80、CD86
等共刺激分子,不表達或極低水平表達MHCⅠ分子,MSC不易被宿主T細胞識別,并能逃脫宿主免疫系統的排斥,因此認為MSC具有低免疫原性。
3MSC在臨床醫學中的應用
3.1MSCs用于心血管疾病的治療機制當MSCs移植到損傷的心肌局部后,MSCs能分化為心肌細胞系,表達心肌特異性蛋白質,包括:αactinin,troponinT,tropomyosin,myosinheavychainMHC,phospholamban,和其他的心肌特異性蛋白質。更重要的是,在MSCs移植后的心肌組織中檢測到了connexin43,該種蛋白質反映的是細胞之間的連接以及細胞與細胞之間的電偶聯。
3.1.1MSCs促進缺血或梗死部位血管再生由于新生血管的生成,增加了梗死部位心肌的血供,通過挽救冬眠的心肌、減少肥大的心肌細胞的凋亡、幫助恢復損傷的基質來減少心室的擴張和改善心功能。
3.1.2MSCs向收縮性心肌細胞分化細胞移植的最初目標是所移植的細胞能取代死亡的可收縮的心肌細胞從而恢復心功能。
3.2MSCs移植治療腦梗死的可能機制
3.2.1刺激內源性神經干細胞和神經祖細胞的增殖分化在正常情況下,中樞神經系統內存在尚未激活的神經元。腦缺血時,BMSCs可激活這部分神經元,從而促進神經功能恢復。
3.2.2MSCs自身分化為神經元樣細胞和神經膠質樣細胞MSCs具有多潛能干細胞特性,在特定條件下可以打破胚層起源的限制向外胚層神經元細胞和內胚層肝卵圓細胞分化,發展為成熟神經細胞,替代損傷細胞,重建神經環路,從而達到恢復神經功能的目的。大量體內外試驗研究顯示MSCs可分化為神經樣細胞和神經膠質細胞。Woodbury等也證實大鼠及人的MSCs經體外傳代后,在特定條件下可分化為神經元。
3.2.3促進血管生成,改善局部血液供應MSCs靜脈移植入腦缺血大鼠模型后,發現大鼠缺血周邊區域有新生的血管生成,同時相應部位血管內皮生長因子(VEGF)的分泌和VEGF受體22的表達增加,提示MSCs有可能通過促進新生血管生成實現來改善神經功能的作用。
3.3骨髓干細胞介導腎臟再生研究
3.3.1由MSC分化形成2004年Marina等研究了MSC對急性腎衰竭時腎實質細胞的修復及腎功能恢復的意義。他們利用抗癌藥物順鉑建立腎損傷模型,將轉保護性順鉑治療基因雄性小鼠骨髓間充質干細胞注射由順鉑引起腎功能缺陷和嚴重腎小管損傷的雌性小鼠。含有Y染色體的細胞定位在腎小管上皮層并表達Lensculinaris凝血素結合位點,證明移植MSC可以修復受損腎臟并可分化為腎小管上皮細胞,從而恢復腎臟的組織結構和功能。順鉑誘導腎小管損傷可以使MSC顯著增強促進腎小管上皮細胞增生的能力。
皮膚細胞“變身”為血細胞
“血荒”是世界性臨床醫學中存在的一個問題，醫院用血頻頻告急，不少需要輸血的病人不得不苦苦等待，錯失了最佳治療時機。最近，一項醫學研究的新成果，為這些人帶來了希望。加拿大研究人員宣稱，他們繞過誘導多功能干細胞，可以直接將人體的皮膚細胞變為血液細胞，這種新方法不僅對于理解細胞分化及再生醫學研究有重要意義，而且它標志了生命科學的一個重要里程碑。3年前，美國人和日本人分別繞開胚胎，直接將普通皮膚細胞轉化為干細胞，已經引起了轟動。如今加拿大人又繞開了干細胞，直接將皮膚細胞轉化為血液細胞。由于這種細胞本身早已發育成熟，它不再需要花時間進行培養，因此這種方法更快捷、更實用。這樣就有望徹底解決病人用血問題，其意義將更大。例如，醫生們可以從白血病患者的身上提取皮膚細胞，直接將它轉變成熟、健康的血細胞，輸入患者自己的體內，不用再擔心有任何排斥反應或發生感染等并發癥；有RH、MNSSU、DUFFY等稀有血型的人也可以事先制造出一些“稀有血液”，以備日后自己或他人急用；那些因為手術或者貧血治療等需要血液的患者也能夠使用自己的皮膚供血。此外，這一研究成果還有一個重要的“潛在意義”，它或許意味著科學家可以利用皮膚細胞制造出其他成熟細胞，例如腦細胞等。如此一來，治療老年癡呆癥和帕金森綜合癥便有了新希望。 研究人員是如何使皮膚細胞變身的呢?簡單的過程如下：他們從各年齡段成年人以及新生嬰兒的皮膚上收集了皮膚纖維細胞，并讓這些纖維細胞感染一種植入了OCT4基因的病毒，這種基因是一種干細胞全能性基因，可將纖維細胞轉化為干細胞，再將這些細胞置于含有多種細胞因子的特殊溶液中進行培養。結果發現，無論接受試驗者的年齡多大，他們的皮膚細胞都可以被“改造”成血細胞，由此生成的血液祖細胞產生了血液所具有的3種細胞――白細胞、紅細胞以及血小板，而且都能夠發揮其應有的功能。
皮膚細胞變為神經細胞
2010年初，美國斯坦福大學醫學院研究人員宣布，他們在實驗中繞過誘導多功能干細胞這一步驟，首次直接將實驗鼠皮膚細胞轉化為神經細胞。這項研究的意義是重大的，在醫學界是一個“巨大的飛躍”，它為研究腦細胞功能紊亂提供了新方法，科學家可能僅在實驗室托盤中就能研究帕金森氏癥、阿爾茨海默氏癥或遺傳性精神病等病癥，找出引起這些疾病的原因，直接用患者自己的皮膚細胞來治療這些疑難雜癥。
皮膚細胞的“變身”是利用了一種名叫“慢病毒”的基因運輸工具來完成的，這種“慢病毒”不像真正的病毒，對人體不會產生不利的影響，但它攜帶和轉化基因的能力卻很強。研究人員首先選擇了19個與細胞重組或神經發展有關的基因作為候選基因，通過慢病毒將這些基因植入到實驗鼠的皮膚細胞中。32天后，其中一些皮膚細胞開始向神經細胞轉化。研究人員根據實驗結果，從19個候選基因中篩選出3個基因，再次利用慢病毒將它們轉入到小鼠尾部的皮膚細胞。一周內，約20％的小鼠皮膚細胞轉化成了神經細胞，這些神經細胞不但有神經蛋白，而且可與實驗中的其他神經細胞形成突觸聯系。
【關鍵詞】流式細胞術；臨床；進展
流式細胞術(flowcytometry,FCM)是20世紀70年展起來的對單細胞定量分析的一種新技術。它借鑒了熒光標記技術、激光技術、單抗技術和計算機技術,具有極高的檢測速度與統計精確性,而且從單一細胞可以測得多個參數,為生物醫學與臨床檢驗提供了全新視角和強有力手段[1]。目前,隨著單克隆抗體技術的發展,流式細胞儀檢測技術已經廣泛使用在基礎研究和臨床實踐的各個方面,發揮著重要作用。本文就其在臨床上的應用綜述如下。
1 流式細胞術在免疫學中的應用
FCM可以進行淋巴細胞亞群分析,可同時檢測出一種或幾種淋巴細胞表面亞群分析,將不同的淋巴細胞亞群區分開來,并計算出它們相互間的比例。通過對患者淋巴細胞各亞群數量的測定了解淋巴細胞的分化功能,鑒別新的淋巴細胞亞群。更重要的是通過研究大多數疾病的特異性淋巴細胞亞群或某些細胞表面標志的存在、缺乏、過度表達等,對一些疾病,如免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤等診斷、治療、免疫功能重建和器官移植監測等有重要的臨床意義。如HIV主要侵襲CD4+T細胞而導致CD4淋巴細胞減少,CD4/CD8淋巴細胞比值下降,為艾滋病的診斷和治療提供依據[2]。在其它免疫功能性疾病的診治方面如系統性紅斑狼瘡(SLE)患者的淋巴細胞變化可反映該病的活動情況和器官侵犯程度,伴有嚴重腎臟損害的SLE患者可出現低CD4+、高CD8+的現象[3]。此外,FCM可以用來進行組織相容性抗原(HLA)群體分析;HLA-B27抗原陽性與強直性脊柱炎等一系列關節病有著不同程度的正相關。FCM應用HLA-B27特異性單抗檢測抗原，其敏感性較傳統的微量細胞毒性實驗大大提高,同時多參數的熒光測定使我們能夠在特定的細胞亞群中分析HLA-B27[4-5],還可以利用FCM進行移植配型移植后免疫狀態監測。
2 流式細胞術在血液學中的應用
血液系統腫瘤的診斷和治療 FCM通過對外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測分析，對白血病、淋巴瘤等各種血液病的診斷、預后判斷和治療起著舉足輕重的作用。FCM采用各種抗血細胞表面分化抗原的單克隆抗體，借助于各種熒光染料測定一個細胞的多種參數，以正確地判斷出該細胞的屬性。各種血細胞系統都具有其獨特的抗原，當形態學檢查難以區別時，免疫表型參數對各種急性白血病、淋巴瘤的診斷和鑒別診斷有決定性作用，其診斷的準確性可達到90%左右[5]。微小殘留病變(MRD)是白血病復發的主要根源,FCM能在患者緩解期檢測是否有殘留病變細胞，及早發現后采取措施避免復發。而且測定 DNA倍體和進行細胞周期分析對指導白血病化療也有一定作用，不同的白血病患者或同一患者在不 同病期白血病細胞增殖狀況不同，定期了解細胞增殖情況采取相應藥物可以提高療效。急性白血病的多耐藥基因(MDR)也常用FCM檢測，FCM特有的敏感性和特異性，用于檢測二氨基苯茚酮 mRNA的表達產物 P糖蛋白(Pgp)及其活性(作為藥物的排出泵，降低細胞內藥物濃度)，可以更直接的反映耐藥程度。陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)是一種造血干細胞克隆病,細胞 CD55、CD59抗原表達減低是該病的一個特點。FCM采用熒光標記的單克隆抗體對血細胞 CD59的表達做定量分析，可以協助臨床做出診斷并判斷疾病的嚴重程度。網織紅細胞計數是反映骨髓造血功能的重要指標。FCM通過某些熒光染料(吖啶橙等)與紅細胞中 RNA結合，定量測定網織紅細胞中 RNA，得到網織紅細胞占成熟紅細胞的百分比。有報道認為[6]FCM比目測法的精確度更高。此外，FCM還可以測量出網織紅細胞的成熟度，對紅細胞增殖能力的判斷很有意義，為干細胞移植術后恢復的判斷、貧血的治療監測、腫瘤患者放、化療對骨髓的抑制狀況等提供了依據。造血干/祖細胞計數造血干/祖細胞具有自我復制和多向分化潛能，是各種血細胞和免疫細胞的始祖。造血干/祖細胞計數對造血干細胞移植意義重大。CD34抗原是早期造血干/祖細胞的表面標志，應用 FCM分析、計數 CD34 細胞已成為造血干/祖細胞移植、造血重建的重要指標。由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白的表達水平的高低來判斷,FCM測定血小板膜糖蛋白的表達情況可以診斷血小板膜糖蛋白異常所致疾病,這類疾病很少見但病因明確,主要是GpⅡb/Ⅲa或GpⅠb/Ⅸ/Ⅴ缺陷所致。患者血小板膜GpⅡb/Ⅲa的缺乏,導致血小板聚集功能明顯低下,這就是常染色體隱性遺傳病-血小板無力癥。而巨血小板綜合征是由于GpⅠb/Ⅸ/Ⅴ復合物數量或質量的缺陷導致的遺傳性出血性疾病。FCM還可以通過單抗免疫熒光標記血小板膜糖蛋白監測血小板功能及活化情況,評價活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前狀態發生發展中的作用,有利于血栓栓塞性疾病的診斷和治療,此外血小板活化時細胞內的鈣離子濃度是活化血小板監測的一項非免疫性指標,免疫性血小板減少性紫癜患者血漿中可產生血小板自身抗體,結合在血小板表面,稱為血小板相關抗體,檢測血小板表面或血清中的相關抗體,可用于該病的診斷及治療監測[7]。
3 流式細胞術在腫瘤學中的應用
FCM在腫瘤學中的應用主要是利用DNA含量測定進行包括癌前病變及早期癌變的檢出、化療指導以及預后評估等工作,FCM可精確定量DNA含量,能對癌前病變的性質和發展趨勢做出判斷,有助于癌變的早期診斷[6]。首先需要把實體瘤組織解聚、分散制備成單細胞懸液,用熒光染料(碘化吡啶P1)染色后對細胞的DNA含量進行分析,將不易區分的群體細胞分成三個亞群(G期、S期、G2期),DNA含量直接代表細胞的倍體狀態,非倍體細胞與腫瘤惡性程度有關。DNA非整倍體細胞峰存在可為腫瘤診斷提供有力依據[6]。腫瘤細胞DNA倍體分析對患者預后的判斷亦有重要作用。異倍體腫瘤惡性病變的復發率、轉移率及死亡率均較高,而二倍體及近二倍體腫瘤的預后則較好。FCM不僅可以對惡性腫瘤DNA含量進行分析,還可根據化療過程中腫瘤DNA分布直方圖的變化去評估療效,了解細胞動力學變化,對腫瘤化療具有重要的意義。臨床醫師可以根據細胞周期各時相的分布情況,依據化療藥物對細胞動力學的干擾理論,設計最佳治療方案。從DNA直方圖直接地看到腫瘤細胞的殺傷變化,及時選用有效的藥物對腫瘤細胞達到最大的殺傷效果。
4 流式細胞術在細胞凋亡和多藥耐藥基因中的應用
細胞凋亡是機體生長發育、細胞分化和病理狀態中細胞死亡的過程,凋亡典型的形態特征是核染色質固縮并分離,細胞質濃縮,細胞膜和核膜皺曲,核斷裂形成片斷,最后形成數量不等的凋亡小體。FCM可以進行DNA含量分析,通過二倍體細胞G0/G1期峰前的亞二倍體峰來確定。在凋亡早期,一些與膜通透性改變及凋亡有關的蛋白在細胞膜表面有特定表達。通過FCM結合單克隆抗體可以檢測表達這些蛋白的細胞,從而確定細胞的凋亡情況。多重耐藥性(multidrugresistance,MDR)是由多藥耐藥基因編碼的P糖蛋白(P-gp)親脂化合物,包括多種抗癌藥物和熒光染料的跨膜性排出泵。從人淋巴細胞排除熒光染料與細胞內P-gp的含量直接相關。當淋巴細胞出現MDR陽性細胞時,患者對化療藥物開始出現耐藥性,需要考慮其它治療方式。多藥耐藥是腫瘤患者化療失敗的主要原因,FCM對多藥耐藥基因(如P170)和凋亡抑制基因及凋亡活化基因表達的測定,可為臨床治療效果分析提供有力依據[8]。
5 流式細胞術在器官移植中的應用
FCM在器官移植中占有重要地位,可被用來判斷供者與受者之間是否合適,用來鑒別和定型同種異體反應抗體[6]。通過供者白細胞和受者的血清共同孵育,如果受者血清中存在針對供者的循環抗體,就會同供者的淋巴細胞結合,再加入熒光素標記的二抗來顯示這種結合,此方法能在移植手術前發現高風險的受體。移植后免疫表型的監測也很重要。FCM可用于檢測移植后血液或移植內免疫成分的變化,以預防移植后免疫
排斥反應,細胞免疫抑制治療效果和移植存活情況,可敏感地預測排斥反應的發生,為臨床治療提供有效依據。
6 流式細胞術在臨床細菌學中的應用
流式細胞術在臨床細菌學中的應用具有快捷、靈敏,能同時進行多參數分析等優點,可廣泛用于細菌、病原體、毒素和血清抗體及藥敏試驗。免疫熒光檢測方法中的流式微球分析(CBA)是FCM的一個新應用。這種方法也可用于真菌、寄生蟲、病毒以及這些病原體的混合感染的檢測。近年來,FCM與熒光染料的聯合運用可判斷細菌的活力和功能狀態,由于速度快,該方法已被建議作為臨床實驗室的常規藥敏試驗。FCM藥敏檢測方法較多,通過測量加入藥物孵育后的散射光的DNA含量來判斷抗生素對細菌的敏感性。該法現被認為是FCM在該領域應用的經典方法[6]。
7 FCM在細胞生物學中的應用
在細胞周期內,DNA含量隨時相發生周期性的變化,通過熒光探針對細胞進行相對DNA含量測定,可分析細胞周期各時相細胞的百分比,周期動力學參數以及DNA異倍體。可利用與鈣離子特異結合的熒光染料和激發光譜或發射光譜是pH值依賴熒光染料進行細胞內鈣離子濃度測定和細胞內pH值測定[9]。
8 流式細胞術在優生遺傳領域中的應用
流式細胞術可使含量極微的胎兒有核紅細胞得到富集,因為有核紅細胞含有胎兒的全部基因,并具有不影響多胎妊娠等優點,結合FISH,PCR等技術,使之具有應用于無創性產前診斷的廣闊前景[10]。
參考文獻
［1］ 王建中．臨床流式細胞分析.上海：上海科技出版社，2005：8-30.
［2］ 邱志峰，王愛 霞，陳鴻珊，等．用流式細胞儀檢測 HIV感染者和 AIDS患者的T細胞亞群.中華實驗和臨床病毒學雜志，1999，13(1)：4547.
［3］ Osada T，Clay TM，Woo CY，et al．Dendritic cell-based immunotherapy．Iht Rev Immunol，2006，25(5-6)：377413.
［4］ Levings MK，Allan S，D Hennezel E，et al．Functional dynamics of naturally occurring regulatory T cells in health and autoimmunity．Adv Immunol，2006，92(12)：119-155.
［5］ 徐兵,胡成,繆旭東,等.106例成人急性白血病流式細胞術免疫分型分析.第一軍醫大學學報,2003,23(10)：1043-1046.
［6］ 孫蒂.再談流式細胞術的廣泛應用.中華醫學檢驗雜志,2002,25(1)：61-62.
［7］ 王志杰,叢雅琴.流式細胞術檢測血小板活化的方法及應用.山東醫藥,2003,28(43)：64-65.
［8］ 孔肇路,金一尊.多藥耐藥相關蛋白的生物學特性與作用的研究進展.中國癌癥雜志,2001,11(4)：375-378.
創傷是醫學中最古老又最新穎的課題。說它古老，因為自有人類出現起就有了創傷；說它新穎，是因為近幾十年來，隨著城市建設和交通的高速發展，以及汽車數量的急劇增加，創傷呈不斷增多之勢。現全球每年因創傷致死者數百萬人，受傷數千萬人以上，故有人將創傷稱之為“發達社會疾病”，或稱“現代文明的孿生兄弟”。在美國，創傷是第4位死因，而20世紀初僅為第7位死因；在我國，創傷已成為城市中的第5位死因，農村中為第4位死因。此外，創傷多發生在青壯年，對社會勞動力的影響很大，其潛在壽命喪失年數（指平均壽命與死亡時年齡之差，即YPLL）遠大于其他疾病。由此可見，創傷對人類的生命健康和社會發展已構成巨大威脅，應當引起全社會更多的關注。
1 創傷流行病學
現代醫學研究表明，創傷像肺癌、冠心病、瘧疾等疾病那樣，也有一定的流行病學規律可循。所有創傷，特別是交通傷，常好發于一定的人群，如一定的年齡、職業、性別、個人心理素質、文化教養等，隨著研究的深入和拓寬，一門新的學科應運而生，這就是創傷流行病學。它是研究創傷發生、影響因素、流行規律和預防措施的一門分支學科［1］。
近年來，不少研究創傷流行病學的學者集中于調查和分析交通事故的好發因素，如人-車-路-環境間的平衡狀態，各個環節在造成車禍中的作用等。國內外的統計資料表明，造成車禍的原因很多，但95%左右是人的因素，如司機過勞、駕車時精力不集中、開車前飲酒或服用興奮劑、超速開車、違章駕駛、行人不遵守交通法規等，共同的特點是安全意識淡薄。由此可見，提高所有道路使用者的交通安全意識，安全教育與懲罰相結合，就可大幅度減少車禍及其所致的傷亡。
另一項重要研究是探討某些人在生理、心理方面的缺陷而表現出來的一定事故傾向性。如能在考駕駛執照時就進行檢測，查出有事故傾向性的人，不發給駕駛執照或進行特殊培訓，則可消除引起車禍的部分隱患。
2 道路交通傷
全球每年因交通事故致死人數約120萬人，受傷約3 000萬至5 000萬人。
WTO預計，至2020年，道路交通傷致死和致殘人數將增加60%，在全球疾病和傷害負擔（含早死和傷殘所致的壽命損失年數）中將由1990年的第9位躍升至第3位［2］。
行人、騎自行車者、摩托車手、電動自行車者受到的保護最少，是“易受傷的道路使用者”，歐洲的一項研究顯示，按出行公里數計算，與小轎車駕駛員死于車禍的可能性相比，騎自行車者是8倍，步行者是9倍，騎摩托車者是12倍［2］。
2004年，我國道路交通事故517 889起，死107 077人，傷480 864人，直接經濟損失約24億元人民幣，萬車死亡率9.93人，10萬人口死亡率8.24人［3］，是車禍和死亡人數最多的國家。
近20年來，國內交通醫學方面作了不少工作［4-7］，主要進展有以下幾方面。
2.1 實驗平臺 在第三軍醫大學交通醫學研究所建立了不同大小和功能的生物撞擊機實驗平臺，可以做不同大小動物的交通傷模擬實驗；2004年又建立了軌道式生物撞擊機實驗室，可進行實車碰撞，真實模擬乘員和行人的交通傷。
2.2 生物力學 先后對顱腦、胸部、腹部、脊柱等部位交通傷的生物力學機制進行較廣泛的研究。提出了顱內應力集中和剪切力是引起顱腦損傷的主要原因；高速牽張變形致心臟破裂；剪切力致肺表面損傷；微血管擴張性撕裂致肺內出血；腹腔臟器不均勻性的相對位移和變形致臟器撕裂和肝內血流壓力劇增，由此發生肝內點片狀出血；此外，還揭示粘性標準（即軀干變形的瞬間速度V與壓縮程度C的最大乘積）與傷情的關系最為密切，兩者間呈“S”形曲線關系，粘性標準可作為有效的傷情指數和診斷指標。
2.3 救治 1986年，政府公布“120”為全國統一的急救電話號碼，從而有效地提高了交通傷救治水平。全國各地參考國外急救醫療服務系統（EMSS）建立了急救網，除院前救治外，還強化了急診科救治和重癥監護室救治，三個環節相互銜接。一些大醫院開展了“一體化”救治，提出入院后救治的“黃金1小時”和“鉑金10分鐘”的理念，從而提高了救治水平，但也存在不少問題，如院前急救網不夠健全，到達現場時間不夠快，急診科與各專科的關系還不夠規范等等。
2.4 交通心理 主要研究駕駛員的知覺和認知（如反應時間、動態視覺、判讀距離、注意廣度等）、狀態（疲勞、精神壓力、清醒程度等）、事故傾向性（約6%～8%的駕駛員有事故傾向性，造成的車禍占30%～40%）等。
3 組織工程和組織修復
組織工程是近20多年來發展起來的一項新的醫療技術，它不僅提供了新的治療方法，而且提出了復制“組織”、“器官”的新理念。其基本原理是：從機體獲取少量活組織，將其中的功能細胞分離出來進行體外培養擴增，然后與可降解吸收的三維支架材料按一定比例混合，植入體內病損部位，最后形成所需要的組織或器官，以達到創傷修復和功能重建的目的［8］。
動物實驗顯示，應用骨髓基質干細胞（BMSC）修復關節軟骨缺損和應用脂肪干細胞體外構建軟骨等均獲得初步效果。臨床上，用患者自體骨髓基質干細胞作為種子細胞修復顱骨缺損、齒槽裂骨缺損、顱面部骨凹陷畸形及四肢骨缺損填充等也取得較為滿意的療效。組織工程化骨可在缺損區內長期穩定存在（隨訪3年以上），基本恢復了患區支撐、保護等原有功能［9］。組織工程皮膚已有數種商品，并已廣泛應用于臨床［10，11］。實驗顯示，在表皮、真皮及毛囊等部位均已成功分離培養出增殖力很強的皮膚干細胞。
用豬自體真皮成纖維細胞為種子細胞，也成功修復自體的肌腱缺損，其形態和功能與正常肌腱非常接近［9］。
最近研究還表明，成年人第二代真皮成纖維細胞與第二代肌腱細胞基因表達譜極其相似，從而提示今后有可能用成纖維細胞作為肌腱組織工程種子細胞以修復缺損的肌腱。
干細胞在組織修復中有重要作用。有證據表明，在皮脂腺、毛囊周圍的干細胞具有多潛能性，這類干細胞可遷移至毛囊以外產生新生的上皮，真皮中的某些干細胞可產生軟骨、肌肉、神經元類的細胞。毛囊周圍的祖細胞在創傷時可變為成纖維細胞。肌肉的再生可來源于骨髓源性的多能干細胞及神經干細胞。神經干細胞可誘導成星形膠質細胞，重建損傷前的微環境，也可誘導成少突膠質細胞，促進髓鞘的再形成。利用成體干細胞可塑性治療心肌梗死和下肢缺血性疾病已獲得初步成效［12］。
利用組織工程制成具有活性表皮和真皮結構的復合皮膚。應用脫細胞異體真皮作為支架，與網狀自體薄皮片復合移植，其皮片韌性、外觀收縮程度均較為理想［13］。
4 損傷控制手術
損傷控制手術（damage control operation， DCO）是近20年來提出并應用的實用外科原則，其目的是穩定傷情，避免生理潛能進行性消耗，為確定性手術贏得時間。
大多數嚴重多發傷可按常規手術方式進行，僅少數患者生理潛能臨近或已達到極限，雖然技術上可完成Ⅰ期修復和重建，但機體本身難以承受或環境不允許，此時需作DCO，適應證的選擇取決于以下幾個方面。①環境因素：如前線手術隊或事故現場離大醫院很遠。②生理潛能參數：如復蘇和手術時間＞90min；嚴重代謝性酸中毒pH＜7.30；體溫＜35℃；凝血機制紊亂或機械性出血；輸血量＞10單位。根據上述生理潛能參數作為DCO適應證常為時已晚，故應在這之前實施。③創傷類型：這是決定DCO的主要依據，如高動能軀干鈍性創傷；多發性軀干穿透傷；大血管伴多臟器傷；多體腔內致命性大出血；復雜臟器損傷等［14］。
治療步驟如下：
4.1 急救手術 控制出血和感染，作胃小腸破裂修補，緊急時僅用鉗夾住空腔臟器破裂處、結腸造瘺等，簡易關閉胸腹腔。
4.2重癥監護 手術后盡快送至重癥監護室處理，主要任務是恢復血容量、復溫、糾正凝血機制紊亂、糾正代謝性酸中毒。
4.3 確定性手術 待生理功能基本恢復正常后，作確定性手術。
5 顱腦傷
最近美國國立神經疾病與腦卒中研究所（NINDS）對大宗病例進行了分析，結果顯示，在谷氨酸受體拮抗劑、激素、自由基清除劑、鈣拮抗劑、生長激素/胰島素樣生長因子、緩激肽拮抗劑、抗癲癇藥等藥物都沒有對顱腦創傷有確切的臨床治療效果［15］。
目前認為有希望的藥物包括：黃體酮、鎂離子、大劑量白蛋白和膽堿脂酶抑制劑——安理申等，但尚需大量臨床研究方可得出結論。
彌漫性軸索損傷（DAI）在重型顱腦損傷中發生率為28%～42%。創傷可引發非離斷性軸索損傷，胞漿蛋白降解酶如Calpain抑制劑能減少傷后軸索腫脹及繼發性斷離。
多中心前瞻性臨床對照研究發現，重型顱腦損傷合并惡性顱內壓增高，標準外傷大骨瓣減壓既簡單又安全，療效優于常用開顱骨瓣［16］。
顱腦傷后的繼發性損傷已引起廣泛重視。目前研究認為，內源性損害因子如乙酰膽堿、興奮性氨基酸、內源性阿片肽、氧自由基以及炎癥反應失控等是繼發性腦損害發生的主要機制。
已發現神經干細胞在一定條件下能分化成神經元，已有人從顱腦損傷病人的腦挫傷組織中分離出神經干細胞，體外增殖后再輸入腦挫傷區，期望能促進腦功能恢復［16］。
6 創傷骨折
6.1 骨折復位技術的發展 近年來AO學者提出的生物學固定新概念（biological osteosythesis，BO），已在我國創傷骨科界得到認可，其主要內容包括：①遠離骨折部位進行復位以保護骨折局部軟組織的附著；②不強求骨折的解剖復位，關節內骨折仍要求解剖復位；③使用低彈性模量的內固定物；④減少內固定物與骨皮質之間的接觸面積。在此理念的影響下，間接復位技術相應問世，這一技術又被稱為韌帶整復術（ligamentotaxis）。由于骨端血供破壞少，骨愈合的速度較直視下的解剖復位明顯加快，這對粉碎性骨折尤為有利［16］。
6.2 骨折固定系統的發展 在BO概念指導下，配合間接復位技術，內固定系統在材料和構型上都有很大發展。低彈性模量固定物材料仍以鈦合金材料最為理想。
6.3 骨組織工程的研究 是組織工程研究領域中最為活躍的一部分，組織工程學的發展將為創傷骨科的臨床治療提供新的治療手段與技術。
7 結束語
創傷的基礎和臨床研究近年來均取得較大的進展，但是距離保護人民健康的要求仍相差甚遠。創傷，特別是交通傷，急劇增多的勢頭尚未得到有效的遏制。
應當強調，創傷在很大程度上是可以預防的，如果預防工作做得好，全民預防傷害的意識提高，創傷會大為減少。其次，創傷醫學與諸多學科相互交叉，既涉及到預防醫學、臨床醫學和基礎醫學，又與醫學以外的其他學科密切相關，如能做到多學科的協作研究，特別是醫學和工程技術兩方面專家密切合作，必將會大大降低創傷的發生率和死亡率。
【參考文獻】
［1］王正國.創傷流行病學.見:王正國主編.創傷外科學［M］.第1版，上海:上海科技出版社，2002，13-15.
［2］Peden M，Scurfield R，Sleet D，Mohan D，et al.World Report on Road Traffic Injury Prevention［R］.WHO Genera.2004，3-29.
［3］公安部交通管理局，中華人民共和國道路交通統計年報［R］（2004年度）.
［4］Wang ZG，Road Traffic Injuries［J］.Chin J Traumatol.2003，6(5):259-264.
［5］王正國.新世紀道路交通事故的發生趨勢［J］.中華創傷雜志，2002，18(6):325-328.
［6］王正國.我國交通安全現狀［J］.中華醫學信息導報.2004，19(1):10.
［7］周繼紅，王正國.我國交通傷研究進展［J］.中華創傷雜志.2005，21(1):71-73.
［8］Stock UA，Vacanti JP，Tissue Engineering:Current State and Prospects［J］.Annu Rev Med.2001，52(1):443-445.
［9］曹誼林，周廣東，劉偉，等.組織工程與創傷醫學［J］.中華創傷雜志，2005，21(1):25-27.
［10］Buinewicz B，Rosen B.Acellular Cadaveric Dermis (AlloDerm):a New Alternative for Abdominal Hernia Repair［J］.Ann Plast Surg.2004，52(2):188-194.
［11］Fivenson D，Scherschum L.Clinical and Economic Impact of Apligraf for the Treatment of Nonhealing Venous Leg Ulcers［J］.Int.J Dermatol.2003，42(12):960-965.
［12］Orlic D，Kajstura J，Chimeti S，et al.Bone Marrow Cells Regenerate Infracted Myocardium［J］.Nature，2001，410(6 829):701-705.
［13］付小兵，程飚.創傷修復和組織再生幾個重要領域研究的進展與展望［J］.中華創傷雜志，2005，21(1):40-44.
［14］王一鏜.嚴重創傷救治的策略——損傷控制手術［J］.中華創傷雜志，2005，21(1):31-35
［15］只達石，張賽.顱腦創傷藥物治療的新進展［J］.中華創傷雜志，2005，21(1):50-52.
踝前區的應用解剖 藍順清，胡興宇
胸導管壺腹的形態學研究 鄒智榮，畢玉順，劉執玉，周小龍，李貴寶，王偉
前列腺術前注藥及改良恥骨上經膀胱前列腺摘除術初探 黃祥，格桑
基質金屬蛋白酶與腫瘤侵襲轉移 劉智敏，王凡
5-羥色胺(5-HT)與胃粘膜損傷和修復關系的研究現狀 唐旭，王澤，鄧才寶，張蘇
肥大細胞的異質性 陳曉宇，賈友蘇
體質人類學研究二十年及其啟示 胡興宇，藍順清
左側椎動脈起自主動脈弓一例 鄒智榮，陳紹春，李仲銘
隨想克隆 孫昭
多媒體技術在組織學教學中應用 陳海英
《人體解剖學》教學中課堂氣氛的創立 董武忠，劉振遠
淺析目標教學中的課后補救 胡文禮
《人體解剖學》教學中板圖的應用 劉振遠，羅衛民
中專解剖學教學中"雙差"生的思考與對策 易前忠，葉常青
臨床醫學專科起點本科班《臨床應用解剖學》教學探討 朱建華，洪永華，李克攻
教育改革淺見 黃啟林
護理專業《解剖學》學習成績的現狀與對策 潘玉康，雷秀兵
現代教育技術在人體解剖學教學中應用的思考 馬大軍，雍劉軍，劉興國
人體斷層解剖學教學的探討 劉衛華，劉興國，馬大軍，米永杰
談解剖教學中的學生能力培養 易前忠
解剖學有關口區的一些名詞概念的探討 雷秀兵，潘玉康，楊陽
擴展實驗教學培養綜合能力 王小標
我怎樣通過試講 蔣艷萍
繪圖法在解剖學教學中的應用 林達
如何配合"大局解小系統"教學制作示教標本 宋濤，李貴寶
《心血管系統解剖》課件的制作和應用 初國良，黃海，彭映基，汪華僑
結腸巨大囊腫伴先天性闌尾缺如一例 趙亮，董浩，胡乃文，劉執玉，劉立平
“綱(功能)舉目(形態)張”——組織學教學方法探討 彭彬，黃安培
組織學實驗考試方法的探討 李中華
初生牛脊髓神經細胞尼氏體硫堇——伊紅染色法 房麗華
家鼠類腎上腺嗜鉻細胞簡易染色法 李莉
普通墨汁對中、小血管行熒光染色 鐘瑞沖，林卡莉
用撕片法顯示胎兒小腸壁外縱肌外側面微血管分布 李銀生，汪艷麗
血液涂片Wright染色法的改進 陳大堤
硫堇塊染色法顯示神經元尼氏體的體會 孫萬彬，趙春芳，谷雙魁，趙京山
采用犀牛牌雙面不銹鋼刀片制作石蠟切片 畢彥忠，陳福來，羅英鐸
神經纖維快速染色改良法 畢彥忠，金曉明，陳福來，黃琪，羅英鐸
影響人胚胎腦組織冷藏因素的研究 張華
潘氏細胞固定和染色法探討 閆愛華，任知春，任秀花
運動神經末梢顯示方法探討 閆愛華，任秀花，任知春
網織紅細胞的顯示及體會 任秀花，閆愛華，任知春
糖尿病大鼠視網膜血管鋪片技術的改進及運用 潘琳，盛瑞紅，彭俊云，周水平
骨磨片封片的探討 宋林，糜建紅
一種顯示網狀纖維的方法 廖大清，馬玉瓊，陳思秀
Mallory三色法在小腸染色上的應用 陳思秀，廖大清，馬玉瓊
制作疏松結締組織教學鋪片的探索 馬玉瓊，陳思秀，廖大清
石蠟切片H-E染色法的經驗和體會 朱麗華，張麗敏，王春燕，孫孝庸
大鼠中樞神經系統連續切片顯示神經核團 陳德英
觀察大鼠胚胎心內膜墊發育時的切面選擇 肖虹蕾，喻青
鋪片在結膜杯狀細胞研究中的應用 佘振玨，柯碧蓮，周國民
不同組織固定液與巴氏染色法異染性現象 韓亞京
肥大細胞數量及脫顆粒變化在小鼠妊娠早期子宮中的觀察 呂丹瑜，楊京京，劉斌
10%福爾馬林與中爾馬林的比較 張寶元
改良潰變神經纖維鍍染方法經驗介紹 買鴻宴，楊立元，楊磊，雷季良
湖南侗族耳的活體觀測與研究 吳億中，皮建輝，何培森
復方丹參注射液對大鼠急性脊髓損傷后神經再生的影響 劉德明，王文敏，劉曾旭，
下頜第一前磨牙根管系統和根尖孔解剖及臨床意義 張玉，鄧德華
以鎖骨內側端最高點為標志行右靜脈角部穿刺的應用解剖 孫國剛，劉玉林，聶紅藝，屈強
肌性動脈內彈性膜的觀察分析 程基焱，劉廣益，吳雨嶺，先雄兵
MERlIN的分子結構及特性 陳永鋒，齊建國，章為
胰島素樣生長因子對神經干細胞增殖分化的影響 龍庭鳳，劉廣益，郭勇，余鴻
雙側巨輸尿管畸形一例 楊朝鮮，曾昭明
干細胞調控機制及體外培養影響因素的研究 何紅媛，王萍，夏冬，吳紹華
足內側皮瓣的解剖學研究及臨床應用 楊開明，徐達傳
針刺鎮痛及其機理 柯青，王廷華，趙有成
淋巴細胞歸巢至腸粘膜組織的分子機理 吳琦，張立平
探索調控人胚分化發育相關基因的時空表達 歐陽秋明，曾蘇，孟珊珊
中樞多巴胺系統與阿爾茨海默病 侯海龍，陳曉蓉，胡祥友
心肌細胞凋亡與高血壓 金迅，靳秋月，何文彤
急性脊髓損傷后aFGF、bFGF的表達 李衛峰，王瑋
超聲檢測妊娠中胎兒的標準化問題 楊太珠，賀延富，羅紅，郭文琪，孫昭
談解剖學教學中的正遷移 吳仲敏
用三種軟件編制解剖學電子講稿的體會 伍家農，張光鵬
關鍵詞：流式細胞術；臨床醫學；應用
近年來，隨著單克隆抗體的應用及流式細胞術的快速發展，流式細胞術（FCM）已成為許多疾病診斷和分性的重要依據。流式細胞術是20世紀70年展起來的一項高新技術，它作為一門生物檢測技術集計算機技術、測量技術、激光技術、流體動力學、細胞化學、細胞免疫學于一體，是對快速直線運動狀態中的細胞、生物顆粒或液體中的大分子物質進行多參數的、快速的定量分析和分選的一種技術［1］。1973年美國BD公司推出全國第一臺流式細胞儀，通過對流動液體中排列成單列細胞或顆粒進行逐個檢測得到該細胞或顆粒的光散射和熒光指標，分析它們的體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學性質，還能對所需要的細胞進行分選等。具有檢測速度快、測量指標多、采集數量大，對所需的細胞或生物顆粒進行分析或分選等特點［2］，其在生物學、臨床醫學、遺傳免疫學、腫瘤學等眾多研究領域得到廣泛應用。
1流式細胞儀的結構及工作原理
1．1流式細胞儀的結構
主要由五部分組成：（1）流動室及液流驅動系統；（2）激光光源及光束形成系統；（3）光學系統；（4）信號檢測與儲存、顯示、分析系統；（5）細胞分選系統。
1．2流式細胞儀的工作原理
將待測細胞染色后制成單細胞懸液，用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的硫酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣鞘液就能夠包繞樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包繞下單行排列，依次通過檢測區域。流式細胞儀通常以激光作為光源，經過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下，產生散射光和激發熒光，這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收，光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大小；熒光信號的接受方向與激光束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號，這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或核內物質的濃度，經光電倍增管接收后可轉換為電信號，再通過模／數轉換器將連續的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號，計算機系統將這些數字信號收集、儲存，以一維直方圖或二維點陣圖及數據表或三維圖形顯示出來，可以用不同的標記物進行雙參數、三參數甚至多參數的分析［3，4］。
2流式細胞儀的技術指標
包括：（1）分析速度：很高可以達到5000個／s左右，大型的流式細胞儀的分析速度可達10000個／s；（2）熒光檢測靈敏度：單個細胞上的熒光分子＜600個，或兩個細胞之間的熒光差＞5％就能區分；（3）前向角散射光檢測靈敏度：一般的可以檢測到的最小顆粒直徑在0．2～0．5μm；（4）分辨率（CV）：一般流式細胞儀能夠達到＜2．0％；（5）分選速度：一般流式細胞儀分選速度＞100個／s，分選細胞純度可達99％［5］。
3流式細胞術在臨床中的應用
3．1在血液學中的應用
流式細胞術通過對外周血細胞和骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測分析對各種血液病如白血病、淋巴瘤等血液系統疾病的分型、診斷、治療及預后判斷均有重要作用。血細胞在白細胞系、紅細胞系、巨核細胞系、血小板及非造血細胞均有不同的分化抗原表達，分布在細胞質、細胞膜中。血液腫瘤細胞的特征是喪失了正常細胞的系類專一性和分化階段的規律性，運用流式細胞術將具有系列特異性并涵蓋不同分化階段的單克隆體作為分子探針來檢測血液腫瘤細胞的內外抗原，可以反映其本質上與正常造血細胞的差異［6］。流式細胞術采用各種抗血細胞表面分化抗原的單克隆抗體，借助于各種熒光染料（異硫氰基熒光素FITC，藻紅蛋白PE等）測定一個細胞的多種參數，以正確判斷出該細胞的屬性。流式細胞術還可以應用在白血病免疫分型方面，目前國內外均主張采用FCMCD45／SSC雙參數散點圖設計方法進行白血病免疫分析。采用此法可將骨髓細胞清晰地分成淋巴細胞、單核細胞、成熟粒細胞、幼稚細胞和有核紅細胞群，這樣可以排除正常細胞對免疫分型的干擾，從而提高免疫分析的準確性，而且測量細胞一般在1～5萬個細胞，快速特異、準確性好，并且能夠提供正常細胞在演變成惡性腫瘤過程細胞基因及抗原標志發生變化的信息。而這種細胞的變化是常規FAB法所不能分辨的。這種分型對于治療方案的正確選擇與預后有著重要的意義同時也提供了可靠的依據［7］。近年研究發現，在臨床血液病檢測和診斷中診斷準確率高達90％以上，與普通檢測法相比準確率提高達20％［8］。流式細胞術可以通過某些熒光染料與紅細胞中的RNA結合，定量地測定網織紅細胞中的RNA，得到網織紅細胞占成熟紅細胞的百分比，從而準確地反映骨髓造血功能。有作者報道FCM方法比目測法結果精確度更高［9］。此外FCM還可以測出網織紅細胞的成熟度，對紅細胞增值能力的判斷很有意義，為干細胞移植術后恢復的判斷、貧血的治療監測、腫瘤患者放化療對骨髓的抑制狀況等提供依據。
3．2在腫瘤學中的應用
流式細胞術在腫瘤學中的應用主要是對腫瘤細胞DNA含量進行測定，包括癌前病變及早期癌變的檢出，輔助腫瘤的早期診斷和鑒別診斷。不僅如此，還可以根據化療過程中腫瘤DNA分布直方圖的變化評估療效，了解細胞動力學的變化。臨床醫生可根據各細胞周期各時相的分布情況，結合化療藥物對細胞動力學的干擾理論，設計最佳治療方案，再依照DNA直方圖直接地看到腫瘤細胞的殺傷變化，及時調整治療方案，選取有效藥物以使對腫瘤細胞達到最大的殺傷效果［10］。
3．3在免疫學中的應用
利用抗原抗體特異性反應的原理將流式細胞儀與單克隆抗體結合，對細胞表面和細胞內抗原、癌基因蛋白及膜受體進行定量檢測，廣泛應用于臨床，對人體細胞免疫功能的評估具有重要的意義。流式細胞術可進行T、B和NK淋巴細胞水平的分析，還可以進行淋巴細胞亞群的分析，區分不同的淋巴細胞亞群，計算其相互間的比例，進而了解淋巴細胞的分化功能。更重要的是，通過研究大多數疾病的特異性淋巴細胞亞群，對一些疾病如免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤等的診斷、治療、免疫功能的重建具有重要的指導意義。例如CD4是輔淋巴細胞，它是遲發性超敏反應的啟動者，是促使B淋巴細胞產生抗體的輔細胞，也是抑制性T細胞的誘導細胞，而CD8是抑制性T細胞，是細胞毒性T細胞介導反應的效應細胞，是抑制B細胞產生抗體的抑制性細胞［11］。在許多免疫性疾病中，淋巴細胞亞群的增多與減少對疾病的發展具有重要的作用。如在先天性發育不良綜合征中FCM分析顯示外周血CD3TCD4＋和CD8＋T細胞均減少，在殘余T細胞中T細胞受體（TCR）αβ分子表達減少，γδ分子表達正常，CD4＋／CD8＋T細胞比例升高，隨著受累者年齡的增加CD8＋細胞數增多，而有些患者T細胞數量增加，最終可達正常［12］。流式細胞術還可以進行HLA群體分析，在強直性脊柱炎患者中用流式細胞術檢測HLA－B27抗原陽性率高達92．6％，而且可以排除交叉反應，提高檢測的靈敏度和準確性［13］。
3．4在中醫藥研究方面的應用
流式細胞術可用于單味中藥有效成分的作用效果測定分析。如研究復方苦參方劑對大腸癌LoVo細胞體外增值凋亡的影響中，分析DNA含量及細胞周期，結果顯示Lo－Vo細胞可檢測亞G1峰，凋亡率于對照組相對比例增高，細胞周期分析發現S期阻滯現象，表明復方苦參方劑具有一定的抑制腫瘤細胞增殖和誘導凋亡的作用［14］。在慢性阻塞性肺疾病的肺氣虛證、肺陰虛證患者中CD4＋、CD4＋／CD8＋均降低，CD8＋升高，說明肺氣虛證與肺陰虛證患者均存在細胞免疫功能低下［15］。
3．5在細菌學中的應用
流式細胞術具有快速、靈敏、精確并能進行多參數分析的特點，可廣泛應用于細菌的診斷和藥敏實驗，是研究細菌異質性、細菌抗生素后效應、多種病原菌混合感染等的有效方法。常用的為流式細胞術藥敏試驗：檢測不同細菌時，根據藥物對細菌的作用機理選擇合適的熒光染料，通過細菌總體平均熒光強度束反映抗生素對細菌的抗菌活性，3h左右即可得出檢測結果，尤其適用于急需藥敏報告的重癥感染病菌的檢測。
3．6在血小板疾病診斷中的作用
血小板是止血機制中一個重要因素，其表面含有多種糖蛋白及各種受體，這些受體與相應的配體相結合后，血小板被激活，并發生形態變化，血小板聚集和顆粒釋放等一系列反應。利用流式細胞術檢測血小板標志物在許多血小板相關疾病的診斷上具有重要的臨床價值［16］。如GPⅠb／Ⅸ復合物先天缺陷導致巨大血小板綜合征；GPⅡb／Ⅲa復合物先天缺陷導致血小板無力癥［17］。在免疫性血小板減少性紫癜的患者中，FCM可以測定患者血液中的PAIgG、PAIgM、PAIgA，熒光陽性百分率的診斷效率為45．8％，平均熒光強度的診斷效率為72．5％，兩項指標聯合的診斷效率為74．2％［18］；因此FCM檢測血小板抗體可用于免疫性血小板減少性紫癜的診斷及治療監測。用FCM內參定位法定量分析血小板微粒在血栓性疾病和血栓前狀態的發生發展中的作用，有利于血栓性疾病的診斷和治療。
3．7在相關疾病檢測中的應用
質量檢測是診斷男性不育癥的重要手段，由于檢測數低及主觀因素的影響，常規的檢查只能反映的形態特征和有限的功能，不能為生育能力提供準確評估的依據，用FCM檢查可把定性的描述變成定量的研究，提高了實驗結果的準確性，可對進行高通量、多參數分析，得到不同時期的細胞數據及形態指標，對臨床診斷發生障礙的性質、原因和程度提高了客觀依據，可對少、弱和無癥的判斷、治療及療效的觀察作出正確的評價，為客觀評價男性生育能力提供了有力的依據。用FCM檢測生精細胞凋亡情況是迅速、準確、客觀、可靠地評估功能和男性生育力的新方法［19］。
3．8在器官移植中的作用
可用流式細胞術判斷供者與受者之間的配型是否合適。檢測受者血清中抗供者的抗HLA抗體，如果受者血清中存在針對供者的循環抗體，就會同供者的淋巴細胞結合，在加入熒光素的二抗來顯示這種結合，就可在移植前后發現高風險抗體，以判斷供者與受者之間是否合適。移植后的免疫表型監測也很重要，移植后的CD4／CD8比值低下的患者排斥反應發生較多，受者血清中產生抗供體細胞抗體預后較差，應及時監測以便進行抗排斥的預防和治療［4］。綜上所述，流式細胞術是一種在醫學基礎、臨床及科學研究中具有廣泛應用前景的細胞分析技術。它具有分辨率高、分辨細胞數量大、參數多、準確性高、速度快等優點。隨著流式細胞分析技術與方法的迅速發展，流式細胞術在臨床的應用范圍也不斷拓展，并將成為推動臨床醫學發展的重要手段。
參考文獻
［1］吳曉娜，蔣紅兵．流式細胞術的工作原理及其臨床應用〔J〕．臨床工程，2011，26（3）：91．
［2］李超，韓金路，王玉剛，等．流式細胞儀的工作原理及應用〔J〕．中國實用醫藥2009，4（20）：235－236．
［3］王書奎，周振英．實用流式細胞術彩色圖譜〔M〕．上海：第二軍醫大學出版社，2004：1－58．
［4］李華，常瑩．流式細胞儀的工作原理及臨床應用〔J〕．中國醫療器械信息2011，17（5）：37－38．
［5］張瑞華，王進，蘭文軍．流式細胞術及其在生物醫學領域中的應用〔J〕．山東輕工業學院學報，2011，25（3）：21－22．
［6］IchinohasamaR，DecoteauJF，myersJ，etal．Threecolorflowcytometryinthediagnosisofmalignantlymphomabasedonthecomparativecellmorphologyoflymphomacellsandreac－tivelymphocytes〔J〕．Leukemia，1997，11（11）：1891－1903．
［7］邢娟娟，黃濤，彭燕．流式細胞術白血病免疫分型的臨床應用〔J〕．實用臨床醫學，2005，6（7）：64．
［8］王文平，楊進波．流式細胞儀在白血病臨床研究中的應用〔J〕．臨床檢驗，2006，3（26）：152－153．
［9］劉小林，周彥，孫林．流式細胞儀檢測網織紅細胞百分比性能評價〔J〕．蚌埠醫學院學報，2010，35（8）：828－830．
［10］董荔紅．流式細胞儀檢測直方圖在常見故障維護中的應用〔J〕．中國醫療設備，2009，24（10）：106－107．
［11］李珺，郝洪軍，高楓，等．流式細胞術檢測腦脊液T淋巴細胞亞群的臨床應用前景〔J〕．中國神經免疫學和神經病學雜志，2011，18（2）：129．
［12］陳冉，白麗．流式細胞術在原發性免疫缺陷病診斷中的應用中國臨床醫學，2011，18（3）：410．
［13］金明威，陳哲，陳穎．流式細胞術檢測HLA－B27及其臨床意義〔J〕．中國優生與遺傳雜志，2011，19（5）：35．
［14］徐月，秦劍，等．復方苦參方劑對大腸癌LoVo細胞體外增殖凋亡的影響〔J〕．第四軍醫大學學報，2009，30（15）：1391．
［15］李澤庚，張四春，等．慢性阻塞性肺疾病肺氣虛證與肺陰虛證患者細胞免疫功能的比較〔J〕．北京中醫藥，2009，28（1）：16．
［16］劉婷婷．流式細胞儀在中西醫領域的應用〔J〕．西部醫學，2011，23（6）：1148－1149．
［17］王志杰．流式細胞術在血小板疾病中的應用〔J〕．血栓與止血學2004，10（1）：39－41．
［18］吳艾霖，吳麗娟，劉毓剛，等．流式細胞術檢測血小板相關免疫球蛋白的臨床應用〔J〕．國際檢驗醫學雜志，2011，32（20）：2304－2306．
皮膚美容自古有之。當代皮膚美容始于20世紀60～70年代，20世紀70年代后期出現皮膚擴張術、皮膚磨削術和化學剝脫術等，20世紀90年代中后期現代激光在皮膚美容中廣泛應用。美容皮膚科學是祖國傳統醫學皮膚美容精華、醫學美學、皮膚科學與先進美容技術相結合的產物。美容皮膚科學又是現代皮膚科學中不可缺少的重要組成部分，它豐富和發展了傳統的皮膚科學。
美容皮膚科學(Cosmetic dermatology)是一門以醫學美學為指導，皮膚科學為基礎，研究人體皮膚的機能與結構，維護、改善、修復和塑造人體皮膚的健康與美的規律的美容醫學分支學科。它是美學、美容學與皮膚科學三者有機結合的產物，目的是為了提高人的生命活力與美感，提高人的生命質量、生存質量及生活質量。美容皮膚科學既是美容醫學(cosmetic medicine)和醫學美容學(medicalcosmetology)的一個分支學科和重要的組成部分，也是皮膚科學的一個新的分支學科。它是結合醫學美容的方式來維護和增進人體皮膚健與美的一門新的醫學分支學科。美容皮膚科學以皮膚科學為基礎，并吸收了中醫皮膚美容、皮膚外科、美容醫學其他分支學科的臨床實踐經驗及各種行之有效的物理、化學與藥物美容、心理美容等技術的豐富營養，使其賦予了新的內涵。
2 美容皮膚科學治療方法的發展與挑戰
美容方法學是一項新的皮膚美容技術，它是由皮膚生理學、化妝品學及美容技藝學組成的一門新興學科，它不僅為患者提供了新的審美選擇，同時也為醫生提供擴大就業的機會。下面將國內外發展較快的美容治療學方法介紹如下：
2.1 肉毒桿菌毒素(BTX)：肉毒桿菌毒素是肉毒桿菌產生的毒素，是一種強烈的神經毒素，其生物學作用是在神經肌肉接頭處阻滯神經末梢釋放乙酰膽堿，從而用于治療各種痙攣、強直以及震顫性疾病。BTX在美容整形領域的應用是由Carru thers(1992年)首先報道，在治療眼肌痙攣時皺眉紋也同時消除。2001年，自加拿大、美國、歐洲和日本相繼批準肉毒毒素用于面部除皺以來發展很快，到2004年已成為美國整形外科醫生開展的占第一位的非手術治療項目。肉毒桿菌毒素(BTX)A和B已成功地使用于美容皮膚病和相關疾病的治療，如：多汗癥、炎性疾病、直腸病以及其他的癥候。BTX－A不僅有效地抑制了乙酰膽堿而且還抑制P物質和谷氨酸鹽，因此可以治療不同類型的濕疹。由于這些機制BTX－A可以止癢用于治療單純苔蘚、水泡型手部濕疹。在美容治療中肉毒毒素是非常有效和安全的，但有注射時疼痛的副作用。4％利多卡因表面麻醉霜可緩解局部的疼痛，因此，在美容治療中提倡使用局部麻醉劑。肉毒毒素還被用來與其他治療方法聯合應用，因其安全、有效、操作簡單、使用方便和副作用小的特點，一直有很高的滿意度，越來越受到廣大求美者和醫護人員的歡迎。但肉毒毒素的副作用也正在被重視，需要嚴格把握適應證及藥物劑量和用藥頻率。
2.2 光動力療法(PDT)：光動力治療在不同的醫學專業領域的利用發展迅速，通過在皮膚病中有效地利用光生物學的光能量和分子氧，在組織光學中選擇性破壞病理細胞。最近發展了聯合局部的光增敏劑5－6氨基－γ－酮戊酸(ALA)或它的甲酯(MAL)誘導光敏化卟啉，后者不產生強烈的全身性光敏作用，并且易于進入皮膚導致光激活。光動力治療中單線態氧取決于病變組織中所應用光的劑量、濃度和局部的光敏(化)劑。局部光動力治療皮膚腫瘤性疾病：光化性角化病、Bowen's病、原位鱗狀細胞癌、基底細胞癌，以及非新生物皮膚病局限性硬皮病、尋常痤瘡和病毒性疣。一般認為PDT的作用機理是通過細胞毒性效應導致腫瘤破壞或免疫調節的作用改善皮膚炎癥狀態8-93。在美國FDA已推薦用于光化性角化病，在歐洲不僅用于光化性角化病和基底細胞癌，還用于Bowen's病、銀屑病、皮膚T細胞淋巴瘤和痤瘡，近年來又用于皮膚年輕化。它的優勢是非侵襲性的靶向治療通過受累面積局部用藥和局部照射，很少有痛苦和不適。光動力療法(PDT)與5－δ氨基－γ－酮戊酸(ALA)結合使用在治療多種皮膚病中受到了醫生和患者的歡迎。光動力學療法(PDT)與5－δ氨基－γ－酮戊酸(ALA)使得許多皮膚病得到了明顯的改善，專家一致認為ALA－PDT治療光化性角化病、淺表性基底細胞癌、光子嫩膚、痤瘡、脂性皮膚、酒渣鼻、鼻贅及常見的皮膚病是安全和有效的。光動力療法治療淺表的基底細胞癌(BCCs)、Bowen's病報道有效率達85％～90％，同時也是優秀的美容治療。特別對老年患者效果更為突出，可能與他們活動量小有關。由于它的通用性、安全性、多效性及美容功能的優勢，ALA－PDT將很快成為臨床應用的主流。
2.3 非剝脫性的皮膚年輕化技術：非剝脫性激光技術包括激光、強脈沖光及射頻。近年來，激光美容因為安全和有效被越來越多的求美者所接受和信賴。脈沖染料激光(532～595nm)可以改善皮膚的充血，減少淺表皮膚色素斑；二極管激光(Smooth Beam，1450nm)和Nd：YAG激光(Cool Touch，1320nm)換膚，通過選擇性破壞含水量多的真皮淺層，靶向為水分子，穿透力強，引起細胞反應以形成新的膠原，同時也有皮膚收縮作用，特別眼瞼部更為明顯。激光皮膚治療技術就是利用激光對病損組織進行修復和皮膚整形的過程。激光不僅可治愈各種胎記，也能治療雀斑、文身、眼眉色斑、鮮紅斑痣及多種色素和血管類皮膚病(如：色素性蕁麻疹、下肢毛細血管擴張、酒糟鼻等)。激光治療皮膚病具有出血少、不留瘢痕、安全無痛，復發率少等優點，是一種比較理想的美容方法。
強脈沖光(IPLs)是一種有特殊波長的寬譜可視光，有較柔和的光熱效應，在不損傷皮膚的前提下可以達到嫩膚、祛斑、除皺及脫毛的美容效果。作為一種利用光熱物理作用理論進行嫩膚美容在美容界是一次技術革新，其令人矚目的臨床效果也逐漸被人們所接受。IPLs并不是單一波長的激光，而是為430～1200hm波段的強光，其作用機制是由于皮膚內色素和血紅蛋白吸收較短波長強脈沖光最多，因此造成皮膚內色素斑和擴張血管(紅血絲)的溫度上升而被破壞，因而達到美白皮膚，祛除色素斑，消除擴張的毛細血管的作用。而較長波段的強脈沖光可促進皮膚的膠原增生，增加皮膚彈性，去除細小皺紋，收縮粗大毛孔。不僅可以治療皮膚毛細血管擴張，對年齡性和日光性皮膚老化、色素斑等有著很好的治療作用，同時還可提高皮膚的彈性和細膩程度，恢復賦有活力的肌膚。近年來面部皮膚年輕化和IPLs儀器性能的改進以及與激光相比的價格優勢導致IPLs的普及使用，IPLs的使用可能超過激光。此外，IPLs抑制皮脂腺的分
泌，殺滅皮脂腺中的丙酸桿菌，促進痤瘡瘢痕恢復，治療瘢痕可以減少紅斑、浸潤、炎癥及肥厚。其優點是簡便、快捷，治療完成后可以立即恢復正常生活和工作。
射頻技術(radiofrequency－RF，Therma Cool技術)，也稱為射頻電流，它是一種高頻交流變化電磁波的簡稱。每秒變化小于1000次的交流電，稱為低頻電流；大于10000次稱為高頻電流。RF就屬于高頻電流，由高頻電流轉化為熱能而起到美容作用。射頻能刺激真皮一膠原立即收縮，效果持久明顯。治療后，膠原連續增生，多數可持續3～6個月，甚至達18～24個月；使皮膚皺紋變淺，表面光滑且富有彈性，對于提升面部松弛，亞洲人效果更為滿意。臨床已證明射頻技術結合ELOS除皺改善面部皮膚年輕化是安全有效的，治療后，患者無需休息，不影響工作。2002年，Weiss 采用單極射頻RF配合冷凍劑使得面部皮膚緊致已治療10000多例，表明不用麻醉劑和鎮靜劑單極射頻RF用于面部緊致是安全的，副作用少，對面部年輕化與其他非侵蝕性設備相比RF副作用要小的多，并且有自其限性。
2.4 藥物美容學：它是在醫學人體審美的理論原則指導下，運用藥物及中藥方劑、針灸、按摩、中藥護膚品等手段所進行的美容。
皮膚增白藥物主要是通過干擾黑素的生物合成、減輕皮膚色素沉著而增白。按其作用機制又分為酪氨酸酶抑制型和非抑制型兩類。酪氨酸酶抑制型皮膚增白藥物包括單酚和多酚類(如：熊果苷，它是從杜鵑花科植物熊果的葉子中分離得到的一種具有脫色作用的單體物質，能明顯抑制黑素細胞的酪氨酸酶活性和黑素產生)、銅離子螯合劑(曲酸及其酯化物等)、阻止酪氨酸酶向前黑素體轉移的藥物(葡萄糖胺類)、改變黑素體超微結構的藥物(癸酸)、促進酪氨酸酶蛋白降解的藥物(亞油酸、γ－亞麻酸)、競爭性酪氨酸酶抑制劑(氨甲環酸等)和其他類(胎盤提取物等)。非酪氨酸酶抑制型皮膚增白藥物包括抗壞血酸及其衍生物(抗壞血酸等)、角質溶解劑(α－羥酸類等)、抑制黑素細胞增殖藥(內皮素受體阻斷劑等)及其他類(過氧化氫等)。
肥胖采用藥物治療是重要的治療手段。目前治療肥胖癥的藥物主要有兩大類：作用于中樞的藥物(西布曲明)一食欲抑制藥和作用于外周的藥物(奧利司他)。超氧化物歧化酶(SOD)是一種極其有效的抗氧化劑，能抵御超氧陰離子自由基對細胞的破壞。研究顯示，SOD是人體內最重要的酶之一，能有效清除超氧陰離子自由基，保持人體細胞膜年青、柔軟和健康的狀態。氫醌(HQ)的化妝品、粗制品及其活性成分的安全性一直存有爭議，氫醌在不超過2％的濃度時可作為一種脫色劑，因為對其結構及不良反應已了解較多，氫醌無疑是目前最有效而且最安全的脫色劑。現已有許多其他脫色劑不斷進入市場，產品含有熊果苷、HQ和植物的類似物，包括含有天然的HQ和熊果苷的卉類，仍然在歐洲一些國家使用。HQ的潛在毒性取決于接觸途徑，嚙齒類毒性有很高的性別差異和種群差異。在實驗動物發現有腎毒性，皮膚毒性研究未顯示有全身毒性反應，在鼠和兔的發育和生殖研究中尚無有意義的結果，對人類的致癌性活體研究尚無資料證實。在非洲的東南部，皮質類固醇作為褪色劑使用是常見的，常常引起類固醇的毒副作用及撤退性皮炎。最新的一種脫色劑就是曲酸，有效性和安全性有待深入研究。
藥物在美容領域里有著廣泛的應用，中藥、西藥和中西藥結合的方法近年來在痤瘡、黃褐斑、增生性瘢痕、扁平疣、斑禿、硬皮病、復發性口瘡等損容性疾病的治療中呈現明顯的效果。
3 美容皮膚科學在臨床醫學中的價值
美容醫學發展的意義與作用已超越了傳統的健康概念，通過美容手術達到外形的改善與增加美感，它是醫學與美學，科學與藝術的結合。它完全順應了現代醫學服務模式的轉變，即由單純的生物醫學模式向生物、心理、社會醫學模式的轉變。
美容皮膚科學的醫學價值在于改善損容性皮膚病對人的心理、容貌和形體美的影響，把驅除疾病、調整皮膚的機能與結構、提高心理素質，達到維護、改善、修復和再塑人體皮膚之健美，增進人的生命活力美感，提高生命質量作為主要實施目標。臨床中，需要我們進一步科學地借鑒各相關學科的知識和技能手段，諸如美容外科、人體皮膚美學、心理學、倫理學、行為學、物理學以及現代激光、藥物代謂學與化學美容護理與保健、醫學生物工程、藝術造型等相關學科的知識和技能，不斷豐富、發展和完善美容皮膚科學。相信隨著科學技術的發展和社會人群審美的需要，美容皮膚科學將會“與時俱進”，不斷擴展。
4 美容皮膚科學前景廣闊，任重道遠
美麗的容顏和健美的體態是人們追求的目標，美容美體是人類進化的產物，是生產力發展、社會文明的標志。隨著社會的發展、生活水平的提高，人們對美的要求越來越迫切和強烈，對美容皮膚醫學提出了更高的要求。醫學美容正面臨著巨大的發展機遇。
皮膚老化是自然老化與環境誘導過程的老化結合。自然老化是生命過程中的必然規律，但是在一定條件下我們可以延緩衰老的發生，主要是進行抗氧化治療。光老化是指在長期日光照射下，引起皮膚外觀、結構及功能改變的老化。而日光中的紫外線與皮膚光老化的發生密切相關。陽光照射產生急性和慢性的損傷，紫外線(UV)照射產生免疫抑制現象，這個現象已引起不同學科的關注，如：皮膚病學、免疫學、光生物學。盡管發生機制一直在爭論，uV的免疫抑制形成皮膚惡性腫瘤(黑素瘤和非黑素瘤)的事實不能回避。
