時間：2022-03-10 01:08:07
引言：易發表網憑借豐富的文秘實踐，為您精心挑選了九篇假期復習計劃范例。如需獲取更多原創內容，可隨時聯系我們的客服老師。
關鍵詞：科技企業孵化器；評價指標；綜合評價
中圖分類號：F276 文獻標識碼：A 文章編號：1003－7217(2009)04－0104－04
一、引言
科技企業孵化器(以下簡稱孵化器)是培育和扶植高新技術中小企業的服務機構。孵化器的發展需要擁有一個健全的硬軟件環境，亟需建立一個最優的資源結構，建立一個高效的運營環境。建立一個科學、規范和制度化的評價指標體系，引導、規范科技企業孵化器的健康發展是十分必要的。國內在績效評價方面的研究不少，如張禮建等構造了科技企業孵化器孵化績效評價指標體系；晏敬東等人針對科技企業孵化器管理績效建立了評價指標體系；劉寧暉、王小敏也基于灰色系統理論，對科技企業孵化器管理績效進行了評價；徐菱涓、劉寧暉針對我國科技企業孵化器績效管理與評價之特殊性進行了研究。也包括針對科技企業孵化器孵化力影響因素的研究，主要是定性的研究，如羅公利，邊偉民的我國科技企業孵化器孵化力影響因素研究。宋艷的我國科技企業孵化器運行的影響因素及對策。
但以上的研究沒有考慮到孵化器自身的發展能力方面的指標，全面科學的研究應在科技企業孵化器運營績效方面的指標基礎上，增加有關自身發展的因素。通過層次分析法分析調查數據，闡述各個指標的量化方法，建立一套有效的評價指標體系。通過該指標體系的建立，希望使科技企業孵化器的功能在科學的發展觀下得到完善，從而能夠對科技企業孵化器的發展起到推動作用，為決策部門提供可靠的信息以制定促進孵化器健康發展的政策。
二、科技企業孵化器評價指標體系建立原則與內容
在借鑒大量評價指標體系設計原則的基礎上，結合孵化器自身的特點，得出科技企業孵化器評價指標體系的建立必須遵循導向性、科學性、可操作性、分類性、鼓勵發展及結果評價和過程評價相結合、重點突出等7個原則。
指標是整個評價體系的核心，對指標的篩選和把握是建立指標體系的基礎。通過閱讀大量文獻，借鑒前人指標體系的研究成果，在強調全面有效的基礎上，第一階段歸納出具有三個層次的指標體系，其中包括2個一級指標、5個二級指標、36個三級指標，指標內容如表1所示。
三、科技企業孵化器評價指標的篩選
通過歸納出具有三個層次的指標體系后，本文選擇湖南省作為調查范圍，針對全省的科技企業孵化器單位進行調查，主要是為指標的篩選提供實證數據。為了確定有效的指標，并由此指標內容形成第一階段調查問卷。
通過問卷設計進行調查，將各個指標對于孵化器企業的重要程度分為“很重要、比較重要、重要、不太重要、不重要”五個層次，用于測量調查對象對于其重要性程度的評價，即獲取最終調查數據。
(一)數據來源與樣本選取
目前，問卷調查對象是湖南省從事孵化器運營單位、政府管理人員和孵化器研究學者、專家。通過現場調研、電子郵件、傳真、信件等方式共發放問卷19份，收回有效問卷11份，問卷回收率為57.9％。收回問卷的孵化器單位，均屬于目前湖南省內影響較大、發展較具規模的孵化器單位。
(二)運用信息熵確定指標
在本研究階段中，主要采用的數據處理方法為信息熵。調查問卷中獲取的對于孵化器指標的評價，即可以看成是一類信息活動，其信息源為問卷調查結果的概率分布，通過信息論理論的量化處理，得到較為客觀的評價，從而消除對評估對象認識上的不確定性。
表2是本次評價指標體系中任選的兩個指標，共有10位專家對其進行了評價，打分如表2所示：
可以得到：
HC=0.8×log0.8+0.1×log0.1+0，1×log0.1=0.921928
HD=0.2×log0.2+0.2×log0.2+0.3×log0.3+0.1×log0.1+0.2×log0.2=2.246439
對于指標c，專家的評價分布大都集中在“重要”這一等級，消除了大部分的不確定性，故而其熵值也很小。而對于指標D，專家評價分布很平均，對于這一指標的區分度較差，基本沒有消除其不確定性，所以其熵值很大。對于D這樣的指標，不確定性太大，不利于評價的公平性、客觀性，故而不會選入我們的指標體系，而指標C集中性很好，可以入選該體系。
運用上面的信息論理論，對第一次調查問卷結果進行計算可得出每個指標的熵值。
通過對各三級指標按計算所得的熵值從低到高進行排序，并針對本次評價指標體系的設置構想，第一次篩選時，將熵值定為1.8及以下的指標，一共選取21個；第二次篩選時，考慮到在問卷結果中體現的指標重要性的偏向性情況，選取3個，即考慮到指標“孵化器基礎設施完備程度”，有40％的調查對象認為其“很重要”，雖然在信息論理論分析的結果并不理想，但因為在專家的評判中重要的程度很高，所以入選本指標體系；對于指標“在孵企業創造的年銷售收入”，有40％的調查對象認為其“比較重要”，40％的調查對象認為其“重要”，其重要性的偏向性較為明顯，且在專家的評判中也處于重要位置，故也選人本指標體系；對于指標“孵化基地面積”，鑒于湖南省孵化器目前發展尚處于初級階段的實際情況，在有關專家意見的基礎上，其在現階段以及可預見的短期未來內，是具有很大實際意義的，酌情人選本指標體系。最終，本指標體系一共選取指標24個，如表3所示：
四、科技企業孵化器評價指標體系確定權重
在以上指標篩選的工作基礎上，確定一個由2個一級指標、5個二級指標、24個三級指標構成的科技企業孵化器評價指標體系，內容如表3所示。根據確定的指標內容形成了第二份問卷，讓調查對象對各二級指標下的三級指標進行兩兩之間的相對重要性水平的對比，以此確定各個指標在指標體系中應有的權重。
問卷設計中，將兩指標之間的相對重要性水平確定為“極端重要、強烈重要、明顯重要、稍重要、同等重要、稍不重要、明顯不重要、強烈不重要、極端不重要”九個水平，調查數據來源于專家調查所得，被調查專家通常為理論與實踐界權威人士，對科技企業孵化器有深入的研究，他們通過理論推導以及實踐經驗選取最合理的選項，以此獲取最終的調查數據。
(一)處理數據得到估計值
本次調查統計數據表現為離散型分布，使用矩法估計模型處理得到樣本均值的估計值，作為兩個指標的相對權重均值。
(二)運用層次分析法確定權重
指標體系的建立過程是將上述處理過的數據運
用層次分析法進行處理，得出每個指標相對于這個體系的相對重要程度。
根據指標之間的隸屬關系與相互之間的聯系，把指標劃分為三個層次，形成一個多層次的結構模型，分別為目標層(即整體指標體系)、一級指標層、二級指標層、三級指標層。建立的層次結構如圖1：
最上層就是研究要達到的整體指標體系，一級指標層(A)、二級指標層(B)、三級指標層(C)所包含的具體指標見表3。
建立了遞階層次結構后，就可以逐層逐項進行兩兩比較，利用評分辦法來比較它們的優劣，并根據一定的比率標度將判斷定量化，形成比較判斷矩陣。
全部計算結果列示如表4：
從表4中可以看出，C3、C4沒有通過一致性檢驗，在統計學方法中通過對數據的合理調整可以使得結果通過簡單，但在本項目中，由于數據面來源廣泛、正確性要求高，因此不能對數據進行隨意的調整。因此，本研究保持了原有的數據及結果。在本研究中，8個矩陣中僅有2個明顯沒有通過檢驗，即75％的結果通過了檢驗，數據的處理結果還較滿意。
完成了層次的單排序之后，要進行層次總排序。利用層次單排序的計算結果，確定遞階層次結構中的最下層(方案層)中每一元素(方案)在總目標(最上層元素)中的權重。
通過層次分析法的處理運算，獲取了整個研究體系中不同指標的相對權重。本研究共選取了24個三級指標，按其重要性權重排列如表5：
基于表5建立了指標體系的評價內容，最為重要的應該是員工素質結構以及優惠政策落實。
五、結束語
本研究采用了信息論中的信息熵對第一份指標篩選問卷進行處理，獲得了“員工素質結構”、“中介機構數量”等24個評價指標；在第二份指標權重設計問卷當中，項目組采用了概率論中的點估計法綜合了當前的問卷數據，得到了修正后的綜合數據以用于最終指標權重的計算。在權重計算的過程當中，本研究使用了統計學中的層次分析法，獲得了指標的相對重要性程度。
以湖南省為數據調查范圍，可以發現研究的結論強化了當前科技企業孵化器仍然處于初級發展階段的結論。湖南科技企業孵化器在此基礎上應該加強此體系建設，根據指標的重要程度給予相應的加強，同時孵化器管理部門也應在此指標體系的參考下，制定相應的政策，予以支持和促進。研究結果同時也反映了目前國內科技企業孵化器最重視的指標。按重要性程度排列的前十位指標多數為孵化器環境評價指標，其中尤以軟件環境為各大孵化器所重視。因此，必須要加大對科技企業孵化器環境建設的力度(尤其是軟件配置環境的建設)，同時積極提供政策性的服務和引入專業化的中介服務機構，這樣才能使科技孵化企業從根本上提供多維的企業孵化服務。
參考文獻：
[1]張禮建，鄭榮娟，程樂，科技企業孵化器孵化績效評價指標體系構造[J]，重慶大學學報(自然科學版)，2005，(3)：148－151。
[2]晏敬東，簡利君，胡樹華科技企業孵化器管理績效的評價指標體系設計[J]，科學學與科學管理，2004，(6)：44－46。
[3]劉寧暉，王小敏，基于灰色系統理論的科技企業孵化器管理績效評價[J]，科學學與科學技術管,2007，(12)：20－22。
[4]徐菱涓，劉寧暉，我國科技企業孵化器績效管理與評價之特殊性探析[J]，中國科技論壇，2008，(2)：32－34。
[5]羅公利，邊偉民，我國科技企業孵化器孵化力影響因素研究[J]，高新技術產業化，2008，(6)：38－47。
[關鍵詞] 孵化器 價值鏈模型 競爭力 因子分析法
競爭力來源于競爭優勢，邁克爾?波特在研究企業的競爭優勢中認為，競爭優勢歸根到底來源于企業為客戶創造的超過其成本的價值。企業正是通過比其競爭對手更廉價或者更出色地開展這些重要的戰略活動來贏得競爭優勢的。當前的價值鏈分析提供了尋找競爭優勢的基本思想和分析框架，即通過尋找關鍵增值環節并優化價值鏈以控制成本、提高企業或產業的運行效率。清華大學的林強、姜彥福認為：“…孵化器是執行孵化機制的社會經濟組織。這種運作機制的初級形態是為被孵企業提供一些硬件設施和優惠政策等；中級形態是為被孵企業提供一些與創業有關的中介、培訓和管理服務等；高級形態是形成孵化器自身的商業運作模式和企業文化，使得孵化器和被孵企業能夠形成良性的互動成長….。”并提出我國孵化器的未來發展“在運作機制上要建立嚴格的現代企業制度，使企業孵化器真正成為市場的主體。”而價值鏈理論正是為這種經濟組織提升自身服務增值能力提供了一個有效的理論工具。孵化器作為一種新型的服務型經濟組織，從它的價值鏈角度分析其競爭力是適合的。
一、孵化器的價值鏈分析
波特認為，“每一個企業都是在設計、生產、銷售、交貨和輔助其產品的過程中進行種種活動的集合體。所有這些活動可以用一個價值鏈來表明”。企業的價值創造是通過一系列活動實現的，這些活動可分為基本活動與輔助活動兩類。
孵化器的基本活動是個孵化器形成其價值的直接活動，包括行政服務；提供咨詢、顧問等中級增值服務；提供投融資平臺、基金管理、風險投資等高級增值服務，是一串各個環節相扣的增值服務過程。
行政服務是開展房屋租賃、設備共享服務、證照辦理等有價工作，是孵化器的基本工作；孵化器為在孵企業提供的技術咨詢、市場咨詢、政策法律咨詢、調研與項目開發、項目評估與建議、商業計劃顧問、政策優惠與辦理、市場營銷開拓等是為在孵企業提供中級增值服務，對初創企業的成長中克服技術風險、市場開拓風險是極為有利的；孵化器組建基金管理公司、風險基金等，為在孵企業在基金投資項目開發、項目的評估與建議、基金管理與處分、企業管理顧問等方面，提供了其高級增值服務，推進在孵初創企業快速成長與擴張。顯然，孵化器的服務過程也就是價值增值過程，是其基本活動的價值鏈形成過程。
孵化器的輔助活動包括基礎設施結構、人力資源管理和社會網絡管理，輔助活動雖然不直接參與價值的創造，但支持與影響孵化器的整個價值創造活動，因此其優劣不僅能直接影響孵化器的經營成本而且能間接影響孵化器的績效。
孵化器要實現其正常運營，需要選擇一個合適的科技研發環境、建設必要的孵化空間、配備必要的孵化器辦公設備等起碼的硬件環境；組建一支高素質、有企業管理經驗的優秀管理團隊，是孵化器正常運營的人力資源要素；孵化器與政府各部門、技術市場、資本市場、高校、科研機構等建立密切的關系，構建與維護戰略伙伴關系的網絡，是孵化器運營的基本軟環境。上述三者是孵化器的基本資源，是孵化器對在孵企業實施孵化活動的輔助活動。
因此，孵化器價值鏈是行政服務、顧問咨詢服務、基金管理及風險投資服務等基本活動,以及起輔助作用的各種活動的集合，其各個獨立的增值服務環節組成了一個孵化初創企業的價值增值系統（見圖）。
圖 孵化器價值鏈模型
二、基于價值鏈的競爭力評價模型
從價值鏈形成過程來看，孵化器的價值增值過程是由提供增值服務的基本活動與輔助活動的有機結合共同實現的。其基礎設施結構、人力資源和社會網絡的開發與利用獨立表現是沒有意義的，只能通過增值服務的作用，將資源與團隊智力資本有機結合，才能創造出績效。
增值服務的作用是孵化，是真正意義上的價值增值活動。在孵化過程中，孵化器的績效由價值增值過程的結果來體現，績效的高低顯現出競爭優勢的高低，表征為競爭力的強弱。依據價值鏈模型，孵化器的資源和人力資本開發與利用升級的價值體現為自我增值，增值服務活動升級的價值體現為兩類：一是綜合能力，表征服務過程的水平；二是就業增量、畢業企業和創造財富，表征服務的結果。
由于孵化器的績效是孵化器的運行結果，根據國家科技部的統計報表，表征孵化器績效大小的主要衡量指標有：
對于綜合能力指標由于涉及較多參數，計算方法復雜，在國家科技部的統計指標中沒有統計，但是我們認為這是一個考察孵化器運行績效的非常重要的指標，必須納入指標體系一并衡量。
從競爭力的計量角度來看，鑒于評價指標體系的主客觀性以及評價指標中不可避免地存在一定程度的相關性，可以采用多元統計中的因子分析法對孵化器競爭力進行綜合評價。因子分析能將具有錯綜復雜關系的指標綜合為數量較少的幾個不相關的主因子，以再現原始指標與因子之間的相互關系；同時，根據孵化器價值鏈模型還可以對指標進行分類，通過降維處理把多項指標轉化為少數幾項綜合指標。
參考文獻：
[1]趙玉海:我國科技企業孵化器的現狀與發展取向.中國科技統計網站.2005.12.14
[2]邁克爾?波特.競爭優勢（中譯本）[M].北京：華廈出版社，2005，3
[3]林強姜彥福:中國科技企業孵化器的發展及新趨勢[J].科學學研究，2002（2）
[關鍵詞] 《愛國者》； 美國文化；價值觀； 符號
作為特定文化的產物，電影作品通過類型化的、視覺譜系的手法建構的是能夠被普遍認同的文化價值觀。好萊塢的類型化影片表達的正是美國特有的文化價值觀。羅蘭德·艾默里克導演，梅爾·吉布森主演的《愛國者》是一部以18世紀70年代美國獨立戰爭為背景的史詩性影片。該影片以明快、有序的線條講述了主人公從反對戰爭到為復仇而戰及最后為自由而戰思想的轉化，以個人命運的轉變反映了時代的變遷，表達了自由與平等、崇尚英雄等典型的美國文化價值觀。
影片中美國文化價值觀的體現
（一）自由與平等觀念的宣泄
好萊塢電影在發展過程中已經建構起健全而穩健的類型體系。類型化的影片雖然情節各異，敘事結構不一，但大體遵循著規范性的敘事模式、造型設計及情感訴求。自由斗士式的人物形象一直是好萊塢史詩影片著力塑造的形象。美國文化強調機會平等、政治權利的平等。“美國人追求個人之自由與平等，歷來主張人應當自立、自強。在美國人眼中，惟有不懈的自我奮斗才有可能獲得自我的實現，體現出人生存于世的意義和價值，也只有依靠自我奮斗而獲得最終成功的人，才會贏得美國人由衷的尊敬和贊嘆。”[1]
《愛國者》中的主人公本杰明·馬丁是英國殖民地的僑民。他是個充滿矛盾的人，年輕時曾經在英國軍隊中服役，作為無情的斗士，在英軍對法國和印第安人的殖民擴張戰爭中立下戰功。但戰爭的殘酷使他的良心飽受著自己過去所犯下罪行的折磨，所以戰后他轉變為和平主義者，告別戎馬生涯，回到了南卡羅萊納州的農場，希望享受安寧的家庭生活。然而，英國統治者為了進一步鞏固對殖民地的絕對統治，征收眾多不合理的高額賦稅，采用高壓手段剝奪當地人的自由權利。這一切迫使殖民地的移民開始反抗。本杰明并不想參與他們的斗爭，但他發現他的生活被獨立戰爭攪得天翻地覆，殘暴的英國軍隊劫掠了他在南卡羅萊納州的家園，殺死他的二兒子并將奪走他所摯愛的一切。現實的發展逐步使這位久離沙場的老戰士認識到，要想保護自己的家庭和安寧，惟一的選擇就是去為一個自由的年輕國家而戰斗。影片中值得一提的還有參戰的一名黑奴，他目不識丁，一開始參戰是因為參戰有報酬并能獲得自由之身，但常被白人同伴嘲笑。隨著戰爭的發展，他已獲得自由，但仍然堅持在戰場，原來鄙視他的白人同伴問他為什么他已經自由了卻還不離去。黑奴回答道：“我自愿在這的。”白人同伴說：“你和我們在一起，我感到無比榮幸。”影片透過這些人物心態及人物關系的處理宣揚了典型的自由與平等的“美國夢”，在年輕的新的國家的形成過程中宣揚人人可以通過奮斗改變自己的地位獲得自由的“美國夢”，自由、平等是實現個人價值的必要條件。
《華盛頓觀察》周刊曾對美國人的“美國夢”做過調查，提出：“美國夢是一個被眾多美國人普遍信仰的信念，機會均等是美國夢的靈魂。社會階級縱向流動，尤其是由下層階級至上層階級的社會流動是美國夢表現出來的最為顯著特征。”[2]正因如此，影片通過主人公及其追隨者最終驅趕走英國殖民者的成功告訴我們普通平凡的人也可以通過自己的努力實現自己的“美國夢”。影片通過黑奴的心理覺悟也表達了黑人對自我精神世界及文化價值的思索。他們遭受種族歧視，在思想意識上受白人強勢文化的影響，在新的文化建構中存在心理沖突與困惑，不斷尋找出路。白人所宣揚的自由、平等、博愛等人文理想，對像影片中黑奴這樣的缺乏身份、邊緣化的群體來說極富吸引力。文化是一個動態的平衡，在美國這個新的國家的形成過程中，多民族的融合逐漸形成文化的聚合體系，而影片給我們找到了一個聚合的途徑就是自由、平等的理想追求。
（二）英雄崇拜意識的體現
好萊塢類型化影片都有規范化的敘事模式、人物造型。在史詩性的影片中除了宏大的史性敘事背景外，影片都會創造基于歷史背景的、強勢的英雄人物形象。“英雄”是從想象和象征的文化譜系中抽象出來，能為他人提供范本的典范。這一形象在不可預測的歷史發展面前總是會歷經坎坷，本身在內心歷程里經歷“救贖”，最終“拯救”世界。這樣的形象代表的是觀者對歷史及事件發展復雜性、不確定性的猶疑不決及希望有人能廓清迷霧，掌控未來的心理渴求。可以說這是美國文化中典型的英雄崇拜意識，也是“個人主義”的體現。“個人主義”是美國文化價值觀的核心之一。美國文化中的“個人主義”強調作為具有獨立精神個體的人應該在宗教和政權之外保持人格上的獨立與自尊。個體的人應該具有勇于擔當、坦誠相待、獨立穩健、富有創造性等人生守則。英雄崇拜意識是好萊塢電影生產與消費的絕對主體，基辛格說：“美國人特別欣賞那種一馬當先帶領車隊的牛仔，那種單槍匹馬進入村莊或城鎮的牛仔。”無數的類型化影片中英雄模型的累積建構了好萊塢影片中富有美國文化價值觀的英雄，英雄敘事成為好萊塢的經典敘事。
影片《愛國者》給我們展示了這種理想狀態的個人英雄，而且這樣的英雄是富有平等、獨立意味的平民意義上的英雄。如前所述，主人公本杰明·馬丁有不平凡的人生經歷，他有謀略，遇到危險鎮定自若，在安享家庭溫情時遭遇家園毀滅、兩個愛子先后被嗜殺的人生悲劇。這樣的人生悲劇也是主人公由最初的追求“田園夢想”，否定戰爭到為復仇而戰，再到為自由而戰思想轉變的重要推動力。他以擔當、決絕、獨立的個性完成了自我療傷，在內心歷程里經歷了自我的救贖。影片中的主人公一旦確立了自我的人生準則，便成為強悍且全能的英雄主義的化身，他或孤身救子，或獨闖敵軍大本營營救隊友，或在戰場上力挽狂瀾，揮舞星條旗高呼為自由而戰。影片中他被敵人稱為“鬼魂”，行蹤不定，威力四射，在戰爭中拯救了整個軍隊。戰爭的大背景仿佛是他一個人的舞臺，獨立戰爭的歷史以極具個人化的方式呈現出來。影片展示的正是美國文化中崇尚個人奮斗、富于冒險、不屈不撓的個人英雄主義，從這一點上看該影片正是典型的美國意識形態性的產物。
影片中文化價值觀的符號體現
（一）具象化的象征符號
關鍵詞：大學生 創業 孵化器 評價指標 孵化績效
中圖分類號：G311 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2016）12（a）-0247-05
2013年，武漢市政府啟動了旨在大力建設科技企業孵化器和促進大學生到科技企業孵化器創業、全方位扶持大學生創新創業的“青桐計劃”，投入項目資金上千萬元，并啟動“科技企業孵化器千萬平方米”的倍增工程。3年來，全市科技企業孵化器面積達920萬平方米，大學生創業企業達2 000余家，創業特區達72個，大學生創業熱情高漲，武漢已然成為大學生創新創業的熱土。“青桐計劃”實施不久，國家人社部、教育部等9個部門聯合啟動了“大學生創業引領計劃”。面對世界經濟不景氣的形勢，在大學生就業成為政府工作重點和社會關注焦點的情況下，已經先行一步的“青桐計劃”就成為全國關注的熱點[1]。
“青桐計劃”在社會普遍關注之下，如何把“青桐計劃”做得更務實、更有效，是我們應該進行冷靜思考的內容。譬如，如何推進“青桐計劃”的深入實施？如何優化大學生創業企業的規范指導？大學生創業企業入孵科技企業孵化器是否應建立有效的入孵篩選（進入）和成功畢業（退出）的機制？大學生企業孵化器的孵化績效如何？如何對“青桐計劃”孵化器的孵化績效進行評價？等等。
1 大學生創業熱之下的冷靜思考
近年來，中國大學畢業生自主創業的比例逐年遞增，大學畢業生創業的熱潮已經悄然興起。麥可思研究院《中國大學生就業報告》的數據顯示，2015屆大學畢業生的自主創業比例是3.0%，比2014屆（2.9%）高出0.1個百分點，2015屆高職高專畢業生自主創業的比例（3.9%）高于本科畢業生（2.1%）[2]。
2015屆本科畢業生自主創業的主要風險因素為缺少資金（28%），其后是市場推廣困難（26%）、缺乏企業管理經驗（24%）。大學生初創企業的存活率很低，這在當下是一個普遍性問題，即使在浙江等有良好創業環境的省份，其成功率也只有5%左右。由于缺乏對行業的深刻認識，缺少對市場的駕馭能力，缺少技術研發經驗，缺少人脈資源，缺少團隊組建能力以及創業團隊的知識和經驗同質化等，大學畢業生創業存在很大的風險，而在經濟下行期的風險更大。“綜觀中國大學生創業實情，成功率僅在1%左右，探究其根源，原始動力問題仍是關鍵，即大學生自身創業動機的不明晰、不堅定[3]。”
武漢市實施“青桐計劃”3年的探索實踐表明，大學生創業成功率低的問題已經開始困擾和影響著“青桐計劃”的深入推進。
綜上所述，在大學生創業熱之下，就大學生孵化器的孵化績效等問題進行冷靜思考，要研究能夠針對各類大學生創業孵化器進行評價的指標體系，幫助政府有關管理部門解決“青桐計劃”存在的問題，為進一步推進“青桐計劃”的實施提供決策依據。
2 建立“青桐計劃”評價指標體系的必要性
“青桐計劃”在執行過程中出現一些問題很正常，需要分析研究、加以調整或修正，以利于計劃的深入推進和實施。
武漢市“青桐計劃”促進大學生到孵化器創業、形成所謂大學生企業孵化器（以下簡稱“孵化器”）。
目前大體有4種運作模式：其一，已有的國家級或市級科技企業孵化器在其園內辟出“大學生創業苗圃”或“大學生創業特區”建成的孵化器；其二，高校在其園校內辟出“大學生創業特區”建成的孵化器；其三，各區與高校合作建設的“大學生創業園”或“大學生創新創業基地”；其四，社會機構用其不少于500 m2的辦公區域建成的孵化器（見圖1）。
這4種模式雖然運作主體不一、孵化舉措各異、力度大小也有差別，但都存在缺乏孵化績效評價的問題，導致許多孵化器出現管理不規范、指導不明確、孵化不到位、績效不明顯等問題。而要評價孵化績效，必然涉及到大學生創業企業入孵篩選（進入）和成功畢業（退出）機制及對孵化器評價指標問題。因此，解決好這些問題，有必要創建和試行大學生創業企業及其孵化器評價指標體系。這不僅有利于優化大學生創業企業的規范指導，促進動態管理，而且有利于提高大學生創業企業孵化器的孵化績效和地方財政資金的使用效率，還有利于為“青桐計劃”可持續發展，并且為管理部門提供決策依據。
科技部公布的《國家級科技企業孵化器評價指標體系（試行）》主要針對的對象為國家級科技企業孵化器各級科技企業孵化器，而對其他科技企業孵化器只具有一些指導和參考意義（見表1、表2、表3）。
該指標體系對國家級孵化器綜合評分的公式如下：
Zj=YijSiWiTi
其中，Yij表示j國家級孵化器第i個指標的數值得分，Si為第i項指標的權重，Wi為第i項指標的二級指標的權重，Ti櫚i項指標的一級指標的權重[4]。
一級指標由服務能力、孵化績效、社會貢獻構成。
而從“青桐計劃”實施3年以來的管理實踐看，若簡單套用科技部版的一級指標的“服務能力”對大學生創業孵化器來進行評價，大學生孵化器的“孵化績效”和“社會貢獻”及其三級指標的得分都將大大低于國家級孵化器的水平。
在“社會貢獻”下面的“吸納就業、成功企業”二級指標，其下面的三級指標均無法套用評價大學生創業孵化器的孵化績效。
在“孵化績效”的二級指標中，“研發效率、獲獎情況”的三級指標也無法在大學生創業孵化器績效評價中使用。
“青桐計劃”孵化器是一種有特定創業對象的孵化器，在建設和管理上要有別于一般的科技孵化器。因此，政府管理部門亟待創建一個能針對大學生孵化器績效進行評價的指標體系，評價大學生企業孵化器的孵化績效，并且通過試行實踐來逐步完善這一大學生孵化器績效評價指標體系[5]。
3 大學生創業企業評價指標體系建議模型
3.1 大學生創業企業評價指標體系
創建大學生創業企業評價指標體系旨在規范指導大學生創業企業入孵孵化器，并順利孵化成功，對于未能畢業的企業則退出孵化器，規范大學生企業從入孵到畢業的評價標準，以推動大學生創業企業健康發展。創建評價指標體系有利于深入實施“青桐計劃”，優化對大學生創業企業的規范指導，促進動態管理，幫助大學生創業企業入孵孵化器并在孵化器順利畢業，促進大學生創新創業健康和可持續發展（見表4）。
該評價指標體系以《關于印發的通知》（武科政〔2012〕24號）并結合“青桐計劃”實施3年來的管理實踐而創建[6]。
該評價指標體系體現了規范指導和服務扶持的原則。對于暫不具備條件、不能入孵或畢業的企業，給予一定準備期或延長期，并由孵化器制定專項計劃進行精準服務扶持。
3.2 評價組織實施
以大學生創業企業為對象，由具備資質的第三方評估機構按照規定、標準和程序，定期組織專家進行評價，并評價結果，作為考核其入孵或畢業的重要依據。
實現動態管理之后，大學生創業企業就要按照評價指標體系的有關要求，按期如實上報有關材料。各孵化器則依據職責，指導、監督和協助大學生創業企業做好評價申報工作[7]。
3.3 評價結果及其應用
有了大學生創業企業評價指標體系，大學生創業企業符合入孵條件的，由孵化器及時吸納入孵；符合畢業條件的，按規定程序報批認定。對那些經孵化畢業的大學生創業企業，在安排相關科技計劃項目和表彰時，應予以優先考慮。
對于不按規定提供評價資料、不予評價認定、提供虛假評價資料的企業，可根據評價結果納入到相關的征信系統管理中去。
4 大學生企業孵化器評價指標體系建議模型
4.1 大學生企業孵化器評價指標體系
以武漢市《市人民政府關于實施“青桐”計劃鼓勵大學生到科技企業孵化器創業的意見》（武政規〔2013〕14號）及其《實施導則》為政策依據，并以《國家級科技企業孵化器評價指標體系（試行）》等相關文件為理論依據，建立大學生企業孵化器評價指標體系（見表5）。
建立大學生企業孵化器評價指標體系有利于加強和規范孵化器管理，引導和促進其提高對大學生創業企業和創業人才的孵化服務能力、績效水平和社會貢獻率。同時，有利于克服政府管理工作中的“路徑依賴”思維慣性，對大學生創業的支持更加精準，推進“青桐計劃”深入實施，促進大學生創新創業的健康發展。
4.2 建立評價指標體系的原則
（1）政策服務原則。現階段，武漢市政府為促進大學生創新創業，出臺了一系列扶持政策。因此，有必要將孵化器為入孵的大學生創業企業爭取政府政策扶持的工作情況作為評價孵化器的重要內容。
（2）動態管理原則。評價指標及其權重系數等根據形勢發展需要進行確定或調整。
（3）績效導向原則。加大孵化績效和社會貢獻評價權重，引導孵化器履職盡責、貼心服務。
4.3 評價組織實施
（1）以孵化器為對象，由具備資質的第三方評估機構按照規定、標準和程序，定期組織專家進行評價，并評價結果，作為考核孵化器的重要依據。
（2）各孵化器按照評價指標體系的有關要求，按期如實上報有關材料。
（3）市科技行政管理部門依據職責，指導、監督和協助全市孵化器做好數據統計、報告、評價等工作。
4.4 評價結果及其應用
（1）孵化器評價結果分為優秀（A）、良好（B）、合格（C）和不合格（D）四個等級。
（2）對評價結果為優秀的孵化器，在安排相關科技計劃項目和表彰時，予以優先考慮。
（3）對不按規定提供評價資料或提供虛假評價資料的孵化器，視為不合格。后者還將被納入征信系統管理。
（4）對第一次評價為不合格的孵化器，責令其提交整改承諾書；對連續兩次評價為不合格的孵化器，取消其孵化器稱號及享受有關政策的資格，并兩年內不受理其重新申報為孵化器的申請。
5 結語
試行大學生創業企業評價和大學生企業孵化器評價指標體系，可以用以對3年來實施的“青桐計劃”進行一個全面評估。試行該指標體系還有利于指導大學生創業的深入實施，化對大學生創業企業的規范指導，促進動態管理，幫助大學生創業企業入孵孵化器并在孵化器順利畢業，幫助孵化器提高對大學生創業企業的孵化能力、績效水平和社會貢獻率。同時，可以有效地改善政府的管理工作，使大學生創新創業進入常態化的發展軌道。
“為者常成，行者常至。”通過在“青桐計劃”中先試行該指標體系，將能夠起到良好的試驗和示范作用。
參考文獻
[1] 武漢市科學技術局.破殼的聲音-青桐計劃一周年[M].武漢：湖北人民出版社，2014：1-45.
[2] 麥可思研究院.中國大學生就業報告[M].北京：社會科學文獻出版社，2014：1-56.
[3] 陳文娟.大學生創業動機影響研究―― 以江蘇省高校大學生為例[J].中國科技論壇，2015（9）：138-142.
[4] 中華人民共和國科技部火炬中心.科技部火炬中心關于印發國家級科技企業孵化器評價指標體系（試行）的通知[EB/OL].科技部火炬中心，http：///2013-7-19.
[5] 武漢市科學技術局.關于下達2014年“青桐計劃”大學生技術創新項目的通知[EB/OL].武漢市科技局，http：///2015-8-10.
[關鍵詞]審計 收費 價格競爭
無論是在西方，還是在中國，審計服務向來是注冊會計師行業的主營業務，因此審計服務價格的高低會直接影響到會計師事務所擁有的經濟資源。審計定價過低將導致事務所經濟資源短缺，這不僅限制事務所聘請高素質的審計人才，而且也限制事務所投入各個具體審計項目的經濟資源。在資源有限的情況下，注冊會計師只有通過降低審計證據的質量和減少審計證據的搜集數量來降低直接成本。但審計證據的不足可能會大大降低會計師發現會計報表錯誤與舞弊的概率，從而使審計風險增加。由此看來，較低的審計定價可能會降低審計服務的質量。然而，作為一種重要的“公共產品”生產活動，審計卻不同于一般的產品或服務生產過程，審計質量的高低，往往直接影響到其產品――審計報告質量的高低，進而在資本市場中對投資者決策進行引導，最終影響到社會資源的流向與配置。當前，我國審計收費作為一種價格體系，具有其獨特的定價模式及特征。筆者希望通過對我國審計定價體制的深入探析，為我國審計行業服務質量的提升及資本市場資源配置體系的優化做出一定的貢獻。
一、我國現行審計市場定價的主要特征
(一)審計收費缺乏公認的定價標準
在西方國家，公認的審計收費定價標準是審計項目所需要的審計工時。一般說來，公司規模越大、業務越復雜精細、審計風險越高的項目所需的審計工時也越多，因此審計定價也理應越高。然而，在我國現行審計服務市場中，卻并沒有一個相對統一的定價標準，有的事務所按被審公司資產規模的大小確定審計價格，有的則按被審公司營業收入的多少來計算，而更多的則是在與客戶反復的討價還價博弈過程中確定審計服務價格。審計定價標準的不統一．會加重整個審計市場運行的不規范程度，直接引致許多違規或非法的行為。譬如說，許多上市公司與事務所私下商定的審計費用支付標準與審計結果直接掛鉤，審計結果對上市公司越有利，則支付的審計費用越高，反之則越低。這樣的價格機制會導致自利的事務所為實現更多的經濟收益，直接或間接地與被審公司合作，共同進行盈余操縱等非法活動，從而實現所謂的“共贏”。事實上，這種情況下最終傷害的就是普通股民的利益，這與“投資者至上”的現代資本市場精神是明顯違背的。
(二)審計收費標準總體偏低
與審計市場較為成熟的英美發達國家相比，我國審計行業收費標準明顯偏低，例如上海市財政部門規定：注冊會計師收費標準為150元／小時，主任會計師則為250元／小時。相比之下，在排除價格指數影響后，英國等外國特許會計師財務報表審計的收費標準則遠高于這一收費標準。就審計項目本身而言，審計服務價格的偏低，無疑會對我國注冊會計師審計的獨立性及行業的發展產生不利的影響。首先，過低的收費使事務所的抗風險能力大大減弱。注冊會計師行業是一個高風險的行業，它的收費中包括了一部分風險補償，并建立一定的風險基金。在注冊會計師執業過程中，風險和資產應該是同步、均衡積累的。如果發生風險積累和資產積累的不平衡，則一旦出現風險損失，就會給事務所造成不可挽回的巨大損失甚至倒閉；其次，較低的收費可能會導致審計質量的下降。由于收費過低，事務所為維持其生存，就必須縮短審計時間以求多做項目，由于沒有足夠的人力及經費去調查取證或進行其他風險控制行為，就會造成注冊會計師被迫降低風險控制成本，這不僅使審計質量大打折扣，而且還進一步增加了審計風險，由此形成惡性循環。總而言之，我國低廉的審計服務價格難以支持注冊會計師收集充分、適當的審計證據，由此我們就不難理解為什么我國上市公司審計失敗事件屢屢浮出水面的現實了。
(三)審計收費價格競爭趨于惡性化
為提高市場占有率而夸大業務量、壓低收費價格以及搞業務回扣等不正當競爭行為在審計行業內已經是公開的秘密。夏冬林等的研究顯示，我國審計收費水平很低，2000年和2001年審計收費占資產比例均值分別為0.0366％和0.0412％，其中對規模越大的客戶，事務所對其爭奪越為激烈，相比較規模較小的客戶而言，所收取的審計服務價格就相對越低。筆者認為，因惡性競爭所導致的低廉的審計服務價格，必將加大審計行業的風險，并嚴重影響審計服務的質量。譬如有的事務所為取得審計業務，在多種審計定價標準中采用明顯較低的審計報價方案，這樣的結果是一方面使得報價合理的事務所退出市場，另一方面也是最嚴重的后果就是低廉的審計收費所必然帶來的低劣的審計服務質量，這就是“劣幣驅除良幣”效應在審計市場中的典型體現。另一方面，審計收費惡性競爭導致的直接后果就是事務所依賴于客戶，在執行審計過程中屈從于客戶的壓力，使其獨立性受到嚴重損害，從而造成一些違規或非法現象的發生。
二、對我國審計收費現狀根源的剖析
(一)當前對審計服務價格的監管存在缺陷
《中華人民共和國注冊會計師法》和《獨立審計準則》都建議事務所按有關標準進行收費，并禁止根據審計結論進行彈性定價的不確定性收費行為。然而，由于在缺乏統一的法定審計服務定價標準的同時，相關主管部門對審計價格行為的監管落實也不嚴，這使得我國會計師行業審計定價方式五花八門，同時還伴隨著大量的不確定性收費現象的發生，這些事實都在嚴重影響著事務所的獨立性，最終的后果就是加劇了我國上市公司財務報表審計結論公允性欠佳的現狀。除此之外，監管不嚴的又一表現就是上市公司審計收費信息披露不規范，財政部和中注協等相關部門并沒有很好的發揮其價格監督的作用。
(二)高質量的審計服務需求不足
傳統審計理論認為，在任何審計市場制度安排下，審計服務的最終需求都米自于報表使用者即投資者、債權人及管理層等利益相關方。但目前在我國，審|十市場卻并不需要高質量的審計服務，其原因在于：就欠成熟的中國資本市場而言，以短線投機為目的n9散0對高質量審計報告的需求動力明顯不足；另一方面，由于在上市公司中國有資產所有權占大多數，必然會使國有產權缺位以及公司治理結構欠完善，這些產權制度痼疾的出現，加上當前審汁市場是由政府一手培育和發展的市場，這使得上市公司大股東代表對高質量審計服務的需求也嚴重缺乏，所以審計服務需求動力就僅僅是由政策等因素形成的被動需求。多數公司僅是出于滿足法規或政策的需要而聘請審計師，價格的高低幾乎是其選擇事務所的唯一標準。在此環境下，事務所也只能以低價來招攬業務，以求在激烈的審汁服務市場中分得一杯羹。
(三)審計法制體系不健全
目前．由于我國注冊會計師民事賠償責任制度尚不健全，審
汁師即使發生嚴重的審計失敗，也沒有經濟賠償壓力，因此，會H師事務所沒有收集足夠的審計證據以控制審汁風險的內在動力，另一方面，由于審計服務這種特殊商品的質量本身難以判斷，在低收費的情況下，也可以取得高收費情況下“一樣”的商品。因此事務所在進行定價決策時便很少考慮提高審計質量和防范審汁風險所需要的審汁成本。尤其是在價格競爭激烈的審訓‘市場環境下，因為沒有相應的法規去嚴格約束事務所的行為，所以事務所很可能會減少必要審汁程序以節約審計成本。由此，在我國目前會計師及事務所的法律風險、民事賠償責任風險近乎為零的環境下，審計收費的惡性競爭難以避免。
(四)審計市場集中度偏低
1j街我圍地方事務所的數量增長非常快，而審計服務的購買方吼Jj市公司的數量卻始終跟不上事務所的業務需求增長速度，因此審|十市場明顯處于買方市場；另外，我國的事務所基本上都是中小所，這些事務所數量眾多且素質參差不齊，這使得我國審計市場份額趨于分散，有資料表明，從04、05年的審計市場集中度來看，國內前10大事務所的市場占有率僅為30％，而美國1955年到1988年問前lO大事務所的市場占有率卻高達80％以上，m此可以推斷，我國的審計市場競爭十分激烈，出現惡性的價格戰也就不足為奇了。
三、規范審計收費定價標準的相應配套措施
我國現階段必須對事務所的審計服務價格確定機制予以一定的規范，應采取一系列配套措施以抑制上市公司用審計收費威肋會計師的獨立性的行為，進而保證審計服務的質量：
(一)由財政部、中注協等聯合制定審計服務定價的最低標準，并對事務所的收費情況進行適當的跟蹤及監控。如前文所述，在我國高質量的審計服務需求不足，這導致低價招攬業務及回扣等現象十分嚴重，事務所甚至不惜以對審計意見的原則性讓步作為行業競爭的手段，因此，在一定程度上事務所的惡性競價行為可被視為其獨立性降低的標志之一。通過相關監管部門列審計服務定價制定行業最低標準，不僅使事務所能夠獲得與其所付出成本相匹配的收益，還在一定程度上提高了審汁師的獨立性，進而提升整個審計行業的社會公信度。此外，相關部門通過對審計行業收費行為的日常監管及檢查活動，還可以深入了解行業的真實定價水平，使得審計收費不再是各所內部的秘密，這反過來又為制定合理的審計服務價格標準提供充分的數據基礎和實證支持。
(二)制定以審計成本為基礎的審計定價標準。當前，制定合理的價格底線是相關部門對審計服務價格進行有效監管的有效途徑之一。在必要的審計成本基礎上進行加成的審計定價策略，可令事務所達到合理的盈利目標，使其不再為了生存而在日常審計活動中簡化必要的審計程序和削減必要的審計成本，這樣就可以保證審計服務的質量，同時還可以有力的保障事務所的獨立性不受影響。鑒于審計這種特殊活動主要消耗的是人力而非物力，由此天然地，社會必要勞動時間理應作為審計定價的參照標準，相應地，民問審計主管部門便可制定以工作量為基礎的審計收費標準。通過制定這種統一的定價標準，必將在一定程度上解決目前審計服務價格體系混亂的問題，從而促使我國審計行業收費行為逐步走向規范化。
(三)積極構造“寡占型”審計市場結構。目前在我國會計師事務所為數眾多(約4800家)，但多數規模較小。面剝低水平的惡性競爭，為求得生存，絕大多數小型所難免會采取低價招徠客戶的定價策略；并在審計過程中屈從于客戶的壓力，以犧牲獨立性為代價，不顧審計質量而與被審單位共謀，出具虛假的審I十報告，以達到保持現有客戶和尋找新市場的日的。而通過國內事務所的大規模合并或聯合，培育“寡占型”的審計市場結構，一方面可使這些事務所在占有充分市場份額的基礎上，具備足夠的實力和底氣與客戶進行審計價格的談判，從而避免中小所之問低水平惡性競爭現象的重演，扭轉審計方在審計市場中的弱勢地位；另外，伴隨著審計市場的放開．國際大型會計公司如“四大”對我國本土的審計行業已造成了巨大的沖擊，面對這些“百年老店”的強勢登陸，我國中小事務所無論在聲譽、審計技術還是經驗等方面都顯得那么脆弱無力．為爭奪市場，除了打價格牌之外他們別無選擇，而價格戰所帶來的惡果就是造成審計質量及整個審計市場公信力的降低。因此，我國的會計師事務所必須走合并聯合的道路，擴大規模，爭取更太的市場空間。總之，培育“寡占型”的審計市場結構，不僅有利于審計匝量的提高，而且有利于增強我國本土審計行業與國際大型會計公司進行抗衡和競爭的能力，而不僅僅是“惡性競價”的能力。
(四)對惡性價格競爭行為進行處罰。《反不正當競爭法》明確規定： “經營者以排擠競爭對手為目的，低于成本的價格銷售商品，屬于不正當競爭行為”。由此看來，事務所以超低價招攬業務的行為也屬不正當競爭行為，相關部門應對那些不遵循職業道德而超低價收費的事務所加大處罰力度，除追究其行政責任外，還要追究其民事乃至刑事責任，為我國審計市場價格體系的良性發育提供強大的法制保障。
參考文獻
[1]劉斌等我國上市公司審計收費影響因素的實證研究審計研究，20031
[2]李爽等監管信號、風險評價與審計定價：來自審計師變更的證據審計研究，2004 1
[3]楊中環對我國注冊會計師審計收費標準的思考價格月刊．2004 7
[4]張艷等會計師事務所審計收費影響因素的實證研究管理科學，2004 8
[5]李現宗等審計收費的經濟學思考中國注冊會計師，200410
[6]戴嫻對我國審計收費制度現狀及根源的思考內江科技，20051
2016年4月，考察安徽、視察鳳陽，重溫改革之路。因中國農村改革發源地“小崗村”而聞名的鳳陽縣，再次邁出具有開創意義的一步――鳳陽縣人民法院和縣工商聯以縣非公有制企業商事調解工作站為平臺，在全國率先引入國家科技支撐計劃支持的應收賬款債權憑證（合同）流轉系統，借助現代信息技術，開出全國首張人民法院蓋章確認的“抵付型應收賬款債權憑證（合同）”，記載債權總額為800萬元，支持當事人債權流轉抵銷債務，成功化解多起企業“三角”和“多角”務糾紛，形成重要創新影響力。
應收賬款債權憑證（合同）流轉，系國家科技支撐計劃“基于債權流轉的新一代電子支付服務體系研發及應用示范項目”，是化解政府及企業債務，減少訴訟的有效途徑。該項目由科技部立項，國務院發展研究中心金融所指導，中國科學技術大學、合肥工業大學及安徽海匯金融投資集團產學研聯合創新。實踐中，主要由地方政府組建市或縣區級的國有獨資應收賬款債權管理公司，協同銀行、保險等專業機構，將企業靜態的應收、應付賬款，通過科技和增信方式，轉換為應收賬款債權憑證（合同）記載的集融資、融貨、流轉、交易和抵付等多功能為一體的動態可流轉應收賬款。
與保理相比，應收賬款債權憑證（合同）流轉重在做實初始債權債務關系；與質押貸款相比，更加注重流轉功能；與清理“三角債”相比，完全市場化運作，沒有行政性質的強制清理，不需要初始資金注入，不放大風險；與政府融資相比，直接盤活企業應收賬款，將更多資金注入實體經濟，并在一定程度上緩解政府債務集中兌付壓力，最終實現逐步化解。目前，津皖浙晉已分別組建了天津渤龍、浙江余姚等8家國資應收賬款債權管理公司，42家中外資銀行參與，業務規模300多億元，未發生一例風險，有效解決企業融資難融資貴，形成了完整的業務網絡和風險控制體系，受到商務部、財政部、中國人民銀行、銀監會、證監會、保監會等部委重視和支持。中國人民銀行指出，這種模式對于解決中小企業融資難、化解三角債、降低流通成本、化解地方政府債務、推動信用體系建設將起到積極作用，支持擴大范圍。
在司法領域，已有鳳陽縣人民法院、合肥市瑤海區人民法院制定《關于應收賬款債權憑證（合同）流轉抵銷債權債務化解矛盾糾紛減少訴訟破解執行難的實施方案（試行）》，化解債權債務糾紛240余起，標的額6億多元，成功將大量商事糾紛化解在訴前。其中，鳳陽縣法院支持開具的首批783張合計800萬元憑證（合同），已累計流轉2979次，化解債權債務糾紛金額2993萬元，最終通過抵付工程款、餐飲費、消費款等實現債權債務閉環抵銷499萬元，剩余301萬元在憑證（合同）期限內繼續流轉，解決了當事人雙方的實際問題。
中考前學習方法.講究質量：糊糊涂涂做三套，不如明明白白做一套，要講質量，求效果。對于老師精心組合的題、自己平時害怕的題、容易出錯的題要精做、用多種方法做，全方位地“透視”；其余題目一般化地做；有把握的題目、做過多遍的題目可以做。
********************************************
【招生范圍】：小學1-6年級，初一初二初三，高一高二高三
【常規課程】：小學、初中、高中各年級各學科同步輔導、數學，英語，物理，化學，作文，語文，歷史，地理，生物。
【熱門課程】：小升初、銜接班、托管班、奧數班 、中考沖刺、藝考輔導。
【課程費用】：不同年級，不同科目，價格不一，詳情撥打免費電話咨詢
【上課地點】：選擇最近校區，來校區上課！（具體校區見下文）
【上課時間】：周六日、寒假、暑假、平時晚上等時間靈活協商安排！
免費咨詢電話：400-0066-911 轉分機 90489（接聽時間8:00-24:00）
溫馨提示:400免費電話使用方法--先撥打前十位,聽到語音提示“請輸入分機號碼”后按“轉分機”后的幾位分機號即可。免費咨詢了解~從現在開始！
********************************************
北京口碑比較好的輔導機構咨詢電話（每日前十位撥打400免費熱線電話咨詢，可享受免費試聽課！400詢電話使用方法：先撥前10位總機號，聽到提示音后再撥后幾位分機號即可咨詢詳情或預約對孩子學業進行免費測評）
北京京翰教育校區及電話：400-0066-911 轉分機 90489
【人大校區】北京市---- 海淀區 400-0066-911轉90489
【公主墳校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90490
【城建校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90491
【勁松校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90492
【朝外校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90493
【亞運村校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90494
【北大校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90495
【宣武門校區】北京市---西城區 400-0066-911轉90496
【四中校區】北京市----西城區 400-0066-911轉90497
【中關村校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90498
【馬家堡校區】北京市----豐臺區 400-0066-911轉90499
【團結湖校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90500
【雍和宮校區】北京市----東城區 400-0066-911轉90501
【方莊校區】北京市----豐臺區 400-0066-911轉90502
【崇文門校區】北京市----西城區 400-0066-911轉90503
【世紀金源校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90504
【牡丹園校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90505
【人大附小校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90506
【北京學院校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90507
【東直門校區】北京市----東城區 400-0066-911轉90508
【望京校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90509
【交道口校區】北京市----東城區 400-0066-911轉90510
【五棵松校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90521
【四通橋校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90520
【公主墳天行健校區】北京市----海淀區400-0066-911轉90522
【大屯南校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90523
【CBD國際部校區】北京市----朝陽區 400-0066-911轉90524
【萬柳校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90525
【亦莊校區】北京市----大興區 400-0066-911轉90526
【石景山校區】北京市----石景山區 400-0066-911轉90529
【蘇州街校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90530
【清河校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90531
【花園街校區】北京市----海淀區 400-0066-911轉90532
【懷柔校區】北京市----懷柔區 400-0066-911轉90533
師資：7000余名專職老師！多年擔任各年級、初高中畢業班教學工作，部分教師長期研究考試命題和閱卷任務。
品牌：二十年辦學經驗！京翰教育遍布全國60余城市，充分了解各地中小學各學科的教學和考試狀況
ps：每天前五位撥打免費電話咨詢的家長，還可以享受免費試聽機會哦！
瀏覽十個廣告，不如一個免費電話了解快！
關鍵詞：探究式教學；高三化學；教學設計
一、引言
高三是高中化學學習的重要階段，起著歸納、總結、綜合、應用中學化學知識的重要作用。高三復習課的主要任務是鞏固學生的基礎知識與基本技能，找出學生知識的盲點與不足進行補缺補漏，最大程度地提高學生分析問題和解決問題的能力。但是面對復習時間緊迫，教學任務繁重等困難，我們只有提高課堂效率才能從根本上解決問題。蘇聯心理學家魯賓斯坦認為：人的思維過程始終始于“問題情境”。提問教學一直是教師經常采用的教學方式，在問與答的過程中實現師生之間的互動，這是一種有效的啟發式教學法。
二、高三復習教學存在的主要問題
很多教師在高三教學實踐活動中，時常感到學生在課堂上的學習效率不高，在一堂容量較大的復習課后，往往出現達不到預期目標的現象。這個現象的主要原因有兩方面：一是教學方式的轉變。在這幾年的課改實踐中，新課改的思想深入人心。教師們在新課授課中能較好地應用和實施新課程理念和新的教學方式。而到高三復習課上，一些老師又習慣性地走回老路，采用“滿堂灌”的教學方式。這種教學方式不僅模糊了教師的職責了——教師是學生活動的組織者和引導者，忽略了學生在復習學習中的主體地位，更是學生學習效率低下的主要原因。二是教學內容的改變。一些教師上高三復習課時，喜歡將高一高二新課的知識點進行提煉總結，將內容進行壓縮再重新講授。這種復習模式雖然可以覆蓋較全面的知識點，但容易讓學生產生厭煩和小視的情緒，降低學生學習興趣與主動性。
三、“問題探究式教學”在高三復習教學中的應用
將高三復習課的知識內容設計成幾個有效的問題串，以課堂探究的形式讓學生在探究中找出知識的薄弱環節，以此激發學生的學習熱情，使其產生強烈的求知欲。再以幾個深入性的問題為引導，加強學生對基本知識的理解與應用。對于教師而言，通過這種方式能準確把握學生存在的主要問題，在課后知識鞏固上也能較有針對性地進行加強，以避免在已懂問題上花費過多精力，讓學生從題海中走出來卻又不錯過提高自身水平的知識鞏固，在減輕課業壓力的同時又加強知識體系。在這種模式的復習教學下，問題設置的技巧性與有效性是其關鍵所在。下面筆者將結合課堂教學實踐對這種教學模式進行探討說明。
1.遞進式。遞進式問題設置是將整體教學內容表現為連續性的問題，環環相扣，層層剖析，步步深入。學生沿著教師設好的階梯拾梯而上，思維一步一步地向縱深發展。隨著問題的解決，完成整個教學任務，教師在其中只作必要的引導和指點。此種問題設置方式適用于較難理解的重要概念復習。例如：在復習魯科《物質結構與性質》電負性與電離能時，我們可以設置以下幾個問題。問題1：分別說出電離能與電負性的定義。問題2：比較第二周期C、N、O三種元素的電離能與電負性。問題3：甲硅烷（SiH4）的結構與甲烷相似。甲硅烷能與硝酸銀發生如下反應：SiH4+8AgNO3+2H2O=8Ag+SiO2H4+8HNO3該反應中氫元素被氧化，由此可判斷電負性：SiH問題4：如圖1中，能正確表示與Si同周期部分元素的第三電離能（I3）與原子序數關系的是。
問題5：已知如下數據請寫出HCN分子中N元素的化合價及說明判斷依據。
在這幾個問題中，我們從易到難有梯度地圍繞電負性和電離能這兩個重要概念進行問題設置。問題1、2屬于基本概念記憶，學生能夠較輕松地解決。而問題3、4、5的解決是建立在學生真正理解概念的基礎上，并能對它進行靈活應用。電負性是表示兩個不同原子形成化學鍵時吸引電子能力的相對強弱。SiH4在反應中氫元素被氧化，由此證明氫元素在化合物中顯-1價，說明在氫元素比硅元素對共用電子對的吸引力更強，所以電負性：Si
2.矛盾式.從學生的心智狀態出發，根據學生理解教材內容時可能產生的困惑，或是學生原有認知結構與新知識的矛盾，從而提出系列問題。此種問題設置方式適用于對學生進行綜合思維訓練，培養學生分析問題、解決問題能力的綜合問題設置。例如我們在定量實驗教學中為了讓學生能夠學會不斷完善實驗設計準確性和科學性可以設置如下問題：已知：為了測定工業純堿中碳酸鈉（含少量NaCl）的質量分數，某學生設計了實驗裝置如圖2。準確稱取盛有堿石灰的干燥管的質量W1，準確稱取一定量純堿W0并放入燒瓶中。從分液漏斗緩緩滴入稀硫酸，待不再發生氣體后。稱干燥管的總質量W2，設學生導出的計算公式為：
Na2CO3的質量分數=■×100%
問題1：W2-W1表示什么？
問題2：如果不計稱量誤差，該生的實驗結果有無明顯誤差？如有，是偏大還是偏小？請簡要說明，并提出補救措施。
通過分析計算公式，學生不難推測出W2-W1應為產生的二氧化碳氣體的質量。設計者的意圖是利用CO2~Na2CO3的關系，通過測定生成的二氧化碳氣體的質量求算參加反應的碳酸鈉質量，從而計算出混合物中碳酸鈉的質量分數。但事實上，此實驗裝置圖中干燥管前后質量差并不單純是生成的二氧化碳氣體質量，至此矛盾產生。抓住時機，老師引導學生通過討論解決矛盾。（1）生成的CO2沒有進行干燥其中混有H2O，被堿石灰一同吸收，使結果偏高；（2）空氣中的CO2和H2O，會被堿石灰吸收，使結果偏高；（3）裝置中殘留的CO2，無法被堿石灰吸收，使結果偏低。為排除以上影響因素，學生不難對實驗裝置圖進行改造和完善，得出了嚴密的定量實驗裝置圖3。在這個解決矛盾的過程中，學生認識到定量實驗設計的嚴密性與準確性是其解題的關鍵所在，同時也提高了分析問題解決問題的能力。矛盾的產生可以最大程度地激發學生探究問題的興趣和求知的熱情。因此這種問題設置方式對于高三化學復習也是十分有效的。
（1）吸收CO2中的H20；
（2）防止空氣中的CO2和H20進入D裝置；
（3）使裝置中殘留的CO2全部進入D。
高考化學是以新情景為依托，以解決問題為目標，綜合考查學生獲取化學信息的能力、分析和解決化學問題的能力以及化學實驗與探究能力。命題重視理論聯系實際，關注化學與科學技術、社會經濟和生態環境的協調發展，以促進學生在知識與技能、過程與方法、情感態度價值觀等方面的全面發展。在這種“問題化”的高三復習模式下，教師引導學生從認知需要出發，通過精心設計復習課的探究問題，把學生的思維帶入問題情境中，讓他們感覺學習是解決新問題的需要，產生一種積極探究問題的心理，大大激發學生的學習熱情。學生在老師的引導探究下，能自主總結各知識點之間的聯系，構建出知識網絡，掌握知識遷移應用的方法，體會到化學學科在生產生活中的重要地位，從而實現提高高三復習課上課效率的目的。
參考文獻：
[1]劉知新.化學教學論[M].第四版.北京：高等教育出版社，2009.
【關鍵詞】 皰疹病毒4型,人;胃腫瘤;鼻咽腫瘤;dna甲基化;啟動區(遺傳學)
【摘要】 目的 研究分析青島地區eb病毒(ebv)相關胃癌及鼻咽癌組織中ebv主要潛伏期編碼基因啟動子甲基化狀態。方法 采用甲基化特異性pcr(msp)及亞硫酸氫鹽基因組測序法(bgs)，分析32例ebv相關胃癌及20例ebv陽性鼻咽癌標本中編碼ebv核抗原ebnas基因的啟動子cp、wp、qp以及lmp1和lmp2a編碼基因啟動子的甲基化狀態。結果 ebv相關胃癌及鼻咽癌腫瘤標本中ebv編碼基因啟動子的甲基化狀態與腫瘤細胞的潛伏感染類型一致：cp和wp呈高甲基化狀態，而qp未發生甲基化;2種ebv陽性腫瘤標本中lmp1和lmp2a編碼基因啟動子甲基化狀態有所不同，兩者在ebv相關胃癌組織甲基化程度明顯高于其在ebv陽性的鼻咽癌(χ2=19.15、11.01，p<0.01)。結論 甲基化是調控ebv主要潛伏期基因啟動子活動的重要機制之一。
【關鍵詞】 皰疹病毒4型,人;胃腫瘤;鼻咽腫瘤;dna甲基化;啟動區(遺傳學)
the methylation status of the major ebv latency promoters in ebvagc and npc zhang xia, liu xia, jing yongzheng, et al (department of microbiology, qingdao university medical college, qingdao 266021, china); [abstract] objective to study and analyze the methylation status of major epsteinbarr virus (ebv) latency promoters in ebvassociated gastric carcinoma (ebvagc) and nasopharyngeal carcinoma (npc) in qingdao area. methods methylation status of specific cpg sites of cp, wp, qp, lmp1 promoter (lmp1p) and lmp2a promoter (lmp2ap) was systematically detected in 32 ebvagcs and 20 npcs by bisulfite genomic sequencing (bgs) and methylationspecific pcr (msp). results the methylation status of these promoters in ebvagc was consistent with npc. wp and cp were hypermethylated, whereas qp was unmethylated; the methylation status of lmp1p and lmp2ap in ebvagc was different from npc: the methylation rates of lmp1p and lmp2ap in ebvagc were significantly higher than those in npc (χ2=19.15,11.01;p<0.01). conclusion the methylation status of the ebv major latency promoters is one of important mechanisms in regulating the activities of these promoters.
[key words] herpesvirus 4, human; stomach neoplasms; nasopharyngeal neoplasms; dna methylation; promoter region (genetics)
eb病毒(ebv)屬皰疹病毒科γ皰疹病毒亞科成員，95%以上健康成人攜帶ebv，與人類多種腫瘤如鼻咽癌、burkitt淋巴瘤、hodgkin病、胃癌等密切相關[12]。不同ebv相關腫瘤組織和ebv陽性細胞系中病毒基因的轉錄表達形式有所不同，在ebv潛伏感染細胞中，可表達的病毒基因有10多種，如ebv核抗原(ebna)1、2、3a、3b、3c和lp，潛伏膜蛋白(lmp)1、2a和2b，ebv編碼的小rna(eber)1和2以及barf0的轉錄產物。根據ebv潛伏期基因表達形式不同分為潛伏ⅰ、ⅱ、ⅲ型3種潛伏類型。ebv相關胃癌和burkitt淋巴瘤組織均可以檢測到潛伏期基因ebna1、ebers、lmp2a、barf0的轉錄表達，為潛伏ⅰ型。除了上述基因以外，在鼻咽癌組織、hodgkin病中還可檢測到lmp1的表達者為ⅱ型潛伏。體外ebv永生化的b淋巴母細胞系(lcl)可檢測到包括6種ebnas和3種lmps等在內的大部分ebv潛伏期基因的表達，稱為ⅲ型潛伏。研究表明，ebv相關胃癌及鼻咽癌組織中病毒基因表現為限制性表達，推測ebv可能通過表觀遺傳機制調控病毒基因啟動子，尤其是通過其甲基化狀態來調控病毒基因的表達[3]。研究顯示，ebv編碼基因啟動子序列中cpg位點甲基化可抑制相應基因的表達，但這些研究主要集中在淋巴細胞來源的ebv陽性腫瘤和細胞系。本實驗選擇上皮來源的ebv相關胃癌和ebv陽性鼻咽癌作為研究對象，檢測其ebv主要潛伏期基因啟動子甲基化狀態，為深入探討ebv相關腫瘤的發生機制及防治提供實驗基礎。
1 材料和方法
1.1 細胞系
ebv陽性akata、raji和b958細胞系由日本鳥取大學醫學部生體情報學教室西連寺剛教授惠贈，分別為潛伏ⅰ型、潛伏ⅲ型burkitt淋巴瘤細胞系，ebv永生化的潛伏ⅲ型lcl細胞系用作該實驗的對照細胞。上述細胞用含有體積分數0.10的胎牛血清、105 u /l青霉素和100 mg /l鏈霉素的rpmi 1640營養液，于37 ℃、體積分數0.05的co2培養箱中培養。
1.2 腫瘤標本
新鮮胃癌組織和石蠟包埋鼻咽癌組織取自青島大學醫學院附屬醫院﹑蓬萊市人民醫院和煙臺毓璜頂醫院。采用原位雜交檢測石蠟組織切片中ebv編碼的小分子非多聚腺苷酸eber1的轉錄[4]，篩選出32例ebv陽性胃癌和20例ebv陽性鼻咽癌標本。
1.3 dna提取
采用酚氯仿異戊醇抽提法常規提取新鮮胃癌組織dna，采用qiaamp dna ffpe試劑盒提取石蠟包埋鼻咽癌組織dna，具體操作步驟按試劑盒(qiaamp tissue kit, qiagen, hilden, germany)說明進行。
1.4 dna處理
取30 μl上述提取的組織dna (2～5 μg)，加33 μl新鮮配制3 mol/l的naoh溶液混勻變性，置37 ℃水浴15 min;將新鮮配制的亞硫酸鹽溶液(2.4 mol/l 亞硫酸鈉，ph 5.0～5.2;0.5 mmol/l 氫醌與3 mol/l naoh的混合液)333 μl加入變性dna中進行修飾，55 ℃避光孵育4 h。修飾后的dna脫鹽純化處理按照dna純化試劑盒(qiagen, hilden, germany)說明操作步驟進行;脫鹽純化的dna溶于50 μl te緩沖液中，室溫下靜置5 min。再加入3 mol/l的naoh 5.56 μl，37 ℃水浴15 min，使其脫磺化基團。將純化后dna溶解于100 μl te緩沖液中，-20 ℃保存備用[5]。
1.5 甲基化特異性pcr(msp)
以亞硫酸氫鹽修飾的組織dna作為模板進行msp，甲基化特異性引物、未甲基化特異性引物以及msp產物大小見表1，其中wp和cp特異性引物參考文獻[56]設計，qp、lmp1 和 lmp2a啟動子特異性引物采用methprimer軟件進行在線設計。 pcr反應體積為25 μl，包括dna模板2 μl，1.25 u熱啟動酶takara，1.5 mmol/l mgcl2，0.2 nmol/l dntp 和0.6 mmol/l引物。反應條件：95 ℃預變性5～10 min;然后95 ℃變性30 s，最適溫度退火30 s，72 ℃延伸1 min，共38個循環;最后72 ℃延伸10 min。擴增產物置20 g/l的瓊脂糖凝膠上電泳，紫外線凝膠成像系統記錄分析結果。ebv陽性akata、raji和b958細胞系dna 作陽性對照，ebv陰性ramos細胞dna作陰性對照。
1.6 亞硫酸鹽基因測序
為進一步檢測lmp1和lmp2a啟動子區域cpg位點具體甲基化狀態，并驗證msp結果，參考文獻設計引物行亞硫酸鹽基因組測序(bgs)[78]，該引物序列位于msp引物序列外側，見表2。pcr反應體積為25 μl，包括亞硫酸氫鈉修飾的dna模板2 μl，1 u熱啟動dna聚合酶takara，1.5 mmol/l mgcl2，0.2 nmol/l dntp和0.6 mmol/l 引物。反應條件：95 ℃預變性5 min;然后95 ℃變性30 s，最適溫度退火30 s，72 ℃延伸1 min，共38個循環;最后72 ℃延伸10 min。擴增產物置20 g/l的瓊脂糖凝膠上電泳，紫外線凝膠成像系統觀察結果后送測序。表1 甲基化特異性pcr引物啟引物類型核酸序列表2 bgs測序引物引物類型核酸序列b958對應序列退火溫度
1.6 統計學分析
采用ppms 1.5[9]統計軟件進行統計學分析,計數資料的比較采用校正χ2檢驗及χ2檢驗。
2 結 果
2.1 cp、wp及qp甲基化檢測
msp檢測結果顯示，b958細胞中未檢測到cp的甲基化，raji細胞中cp高甲基化，但在akata細胞系中同時檢測到甲基化和未甲基化的cp。raji和akata細胞系中wp呈高甲基化，但在b958細胞系中則呈部分未甲基化現象;3種細胞系中均未檢測到qp的甲基化。本實驗檢測的52例ebv陽性腫瘤組織均表現為cp和wp高甲基化狀態，而qp呈低甲基化狀態。msp檢測3種細胞系和部分ebv陽性標本wp、cp及qp甲基化狀態的電泳結果見圖1～3。
2.2 lmp1基因啟動子甲基化檢測
msp檢測結果顯示，32例ebv相關胃癌組織中lmp1啟動子均呈高甲基化狀態;20例鼻咽癌標本檢測到3種msp結果類型，其中包括m型9例(45%)、u型6例(30%)，m+u型5例(25%)，結果見表3。圖4為msp檢測2種ebv陽性細胞系和部分ebv陽性標本lmp1啟動子甲基化狀態的電泳結果。bgs檢測結果顯示：b958和akata細胞系lmp1編碼基因啟動子區的25個cpg位點均沒有發生甲基化;ebv陽性腫瘤組織的檢測結果與msp結果基本一致，除n43外，其余標本該區域25個cpg位點呈甲基化狀態。見表4。
2.3 lmp2a基因啟動子甲基化檢測
msp檢測結果表明，在84.38% (27/32)ebv相關胃癌和40%(8/20)的鼻咽癌標本中，lmp2a編碼基因啟動子表現為高甲基化，結果見表3和圖5。bgs檢測的結果顯示，b958和akata細胞系lmp2a編碼基因中啟動子區的20個cpg位點均沒有發生甲基化;ebv陽性腫瘤組織的檢測結果與
q7、q31、y13a 為ebv陽性胃癌標本，n31、n43為ebv陽性鼻咽癌標本，akata、raji、b958為ebv陽性細胞系。m代表采用甲基化特異性引物m1/m2的pcr結果，u為采用甲基化特異性u1/u2引物的pcr結果。表3 msp檢測ebv編碼基因啟動子甲基化狀態啟動子類型甲基化類型ebvagc(例)ebv陽性npc(例)
msp檢測結果基本一致。見表4。bgs測序結果證實，5例msp結果呈u+m的ebv陽性腫瘤標本(q215、da53、da78、da93和n36)中，lmp2a啟動子區域cpg位點呈部分甲基化。在3例ebv陽性胃癌標本(da53、da78和da93)中，lmp2a編碼基因部分cpg位點存在2種不同的甲基化形式，即甲基化(c)與未甲基化(t)同時存在(圖6)。
2.4 lmp1和lmp2a基因啟動子在ebv陽性胃癌和鼻咽癌中的甲基化率
ebv陽性胃癌組織中lmp1和lmp2a基因啟動子甲基化陽性率明顯高于鼻咽癌組織，差異有顯著性(χ2=19.15、11.01，p<0.01)。見表5。表4 bgs檢測lmp1和lmp2a編碼基因啟動子cpg位點甲基化狀態msp結q31、da53和da78為ebv陽性胃癌標本，n33、n39、n36均為ebv陽性鼻咽癌標本。
圖5 msp檢測lmp2a編碼基因啟動子甲基化電泳結果
圖中序列276對應表4中的cpg位點是14，287對應的cpg位點是15，310、313、315對應的cpg位點分別是16、17、18。如圖所見位點14、15存在兩種波峰，提示c與t同時存在;位點16、17、18僅一種波峰，即c。表5 ebv陽性胃癌和鼻咽癌中lmp1p和lmp2ap甲基化率的比較組 別nlmp1p陽性(例)陰性(例)甲基化率
3 討 論
基因表達調控區域的dna序列發生化學修飾可影響基因表達，dna甲基化是最重要的修飾形式之一。本實驗證實，ebv相關胃癌和ebv陽性鼻咽癌組織中，病毒基因表達調控區dna的甲基化與ebv潛伏期基因的表達密切相關。
編碼ebv核抗原ebnas的啟動子包括wp、cp和qp，其中wp和cp為ebnas的共同轉錄啟動子，可轉錄合成全部6種ebnas mrna，而qp為ebna1的專有啟動子，選擇性轉錄合成ebna1 mrna。ebnas在ebv相關胃癌及鼻咽癌組織中表達類型相同，僅ebna1表達，其表達受cp、wp和qp等3種啟動子調控[10]。實驗證實，wp和cp引物序列所含cpg位點的甲基化狀態可很好地反映啟動子的甲基化狀態[56]。本研究msp檢測結果顯示，在ebv相關胃癌及鼻咽癌組織中wp和cp表現為高甲基化，而qp則未發生甲基化，表明潛伏ⅰ和ⅱ型ebv陽性腫瘤組織中ebna1的表達由未甲基化的qp啟動[1112]。由此可見，啟動子區域cpg位點甲基化狀態與ebv基因表達密切相關，并呈反向關系，即dna甲基化一般抑制基因表達;而非甲基化一般與基因的活化相關。
通常認為在潛伏ⅲ型細胞系中，ebnas的表達受wp/cp調控，而qp處于沉默狀態。本實驗結果顯示，在b958細胞系中wp、cp和qp均呈低甲基化狀態，表明ebna1的表達由三者共同調控，其他ebnas的表達則由wp/cp調控。研究證實，raji細胞所有ⅲ型潛伏基因均表達，理論上6種ebnas mrna的轉錄表達是由wp/cp啟動，但本研究顯示raji細胞系中wp和cp呈高甲基化狀態，提示ebna1的表達受qp調控，其他ebnas的表達不受wp/cp調控，推測raji細胞系中ebnas的表達存在其他調控機制。研究顯示，ebv陽性bl細胞系在體外培養時易發生表型改變，如ebv核抗原表達的改變，早期傳代病毒基因表達呈高度限制性，僅ebna1表達;隨著傳代次數的增多晚期至少表達9種不同的病毒蛋白(ebna1、2、3a、3b、3c，lp，lmp1、2a、2b)[1314]。我們的結果也顯示，akata細胞系cp區域有少量cpg位點未發生甲基化，而且akata細胞系lmp1和lmp2a編碼基因啟動子的甲基化狀態也反映出其在體外培養過程中發生了表型改變。推測體外細胞培養條件與人體內環境明顯不同，缺乏免疫監視，對細胞系的研究可反映但不能代表原始腫瘤組織中ebv主要潛伏期編碼基因啟動子的甲基化狀態，因此有必要對原始腫瘤組織標本進行研究。
bgs檢測lmp1和lmp2a啟動子區域cpg位點甲基化結果表明，2種上皮來源的ebv陽性腫瘤組織中存在病毒基因啟動子不完全甲基化現象。1996年，robertson等[14]在對ebv陽性burkitt淋巴瘤和hodgkin病腫瘤組織中cp甲基化狀態進行研究時就發現存在不完全甲基化現象。我們的前期研究結果也證實，lmp1和lmp2a在ebv陽性胃癌組織中表達不同，其中lmp1不表達，而lmp2a僅在部分標本中表達[15]。fahraeus等[16]采用免疫印跡法檢測到lmps在約71%鼻咽癌組織(標本來源中國)中表達。本研究結果顯示，2種ebv陽性腫瘤組織中lmp1和lmp2a編碼基因啟動子的甲基化狀態有所不同，在ebv相關胃癌標本所有的lmp1基因啟動子和絕大部分(27/32)lmp2a編碼基因啟動子呈高甲基化狀態;而在鼻咽癌組織中，lmp1和lmp2a編碼基因的甲基化程度明顯下降，高甲基化率分別為45%和40%，表明ebv相關基因調控區域dna甲基化狀態是基因表達的重要調節機制之一。bgs檢測結果所示的部分ebv陽性胃癌組織標本中部分cpg位點u與m同時存在，我們推測其原因有兩種：一是等位基因甲基化情況不一致;二是病毒基因組dna甲基化狀態不同(病毒部分dna甲基化而另一部分dna未甲基化)。
總之，ebv陽性胃癌及鼻咽癌組織中，ebv主要潛伏期編碼基因啟動子區域cpg位點甲基化狀態與其表達呈負相關，ebv基因的高甲基化狀態有助于其逃避免疫活性個體的免疫系統的監視，并長期存在宿主細胞內，其在腫瘤的發生、發展中的具體作用機制有待于進一步研究。
【參考文獻】
[1]masucci m g, ernberg i. epsteinbarr virus: adaptation to a life within the immune system[j]. trends microbiol, 1994,2(4):125130.
[2]adms a. replication of latent epsteinbarr virus genomes in raji cells[j]. j virol, 1987,61(5):17431746.
[3]vogt p, jones p a. current topics in microbiology and immunology, dna methylation and cancer[m]. berlin: springerverlag, 2000:2134.
[4]fukayama m, hayashi y, iwasaki y, et al. epsteinbarr virusassociated gastric carcinoma and epsteinbarr virus infection of the stomach[j]. lab invest, 1994,71(1):7381.
[5]tao q, swinnen l j, yang j, et al. methylation status of the epsteinbarr virus major latent promoter c in iatrogenic b cell lymphoproliferative disease. application of pcrbased analysis[j]. am j pathol, 1999,155(2):619625.
[6]hutchings i a, tierney r j, kelly g l, et al. methylation status of the epsteinbarr virus (ebv) bamhi w latent cycle promoter and promoter activity: analysis with novel ebvpositive burkitt and lymphoblastoid cell lines[j]. j virol, 2006,80(21):1070010711.
[7]takacs m, salamon d, myohanen s, et al. epigenetics of latent epsteinbarr virus genomes: high resolution methylation analysis of the bidirectional promoter region of latent membrane protein 1 and 2b genes[j]. biol chem, 2001,382(4):699705.
[8]salamon d, takacs m, schwarzmann f, et al. highresolution methylation analysis and in vivo proteindna binding at the promoter of the viral oncogene lmp2a in b cell lines carrying latent epsteinbarr virus genomes[j]. virus genes, 2003,27(1):5766.
[9]周曉彬,紀新強,徐莉. 醫用統計學軟件ppms 1. 5的組成和應用特點[j]. 齊魯醫學雜志, 2009,24(1):91.
[10]yoshioka m, kikuta h, ishiguro n, et al. unique epsteinbarr virus (ebv) latent gene expression, ebna promoter usage and ebna promoter methylation status in chronic active ebv infection[j]. j gen virol, 2003,84(5):11331140.
[11]brooks l, yao q y, rickinson a b, et al. epsteinbarr virus latent gene transcription in nasopharyngeal carcinoma cells: coexpression of ebna1, lmp1, and lmp2 transcripts[j]. j virol, 1992,66(5):26892697.
[12]deacon e m, pallesen g, niedobitek g, et al. epsteinbarr virus and hodgkin’s disease: transcriptional analysis of virus latency in the malignant cells[j]. j exp med, 1993,177(2):339349.
[13]rowe m, gregory c. epsteinbarr virus and burkitt’s lymphoma[m]// klein g. advances in viral oncology, v018. tumorigenic dna viruses. new york: ny, raven, 1989: 237.
[14]robertson k d, manns a, swinnen l j, et al. cpg methylation of the major epsteinbarr virus latency promoter in burkitt’s lymphoma and hodgkin’s disease[j]. blood, 1996,88(8):31293136.
